Optimasi penetapan kadar Levofloxacin dalam Kromatografi cair kinerja tinggi

SOPYAN, Iyan, Prof.Dr. Sudibyo Martono, MS.,Apt

2007 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Levofloxacin merupakan antibiotika fluoroquinolon yang lebih poten dari ofloxacin, selama ini belum ada penetapan kadarnya dalam plasma darah manusia menggunakan teknik solid phase extraction (SPE) diikuti kuantifikasinya secara kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) detektor UV. Tujuan penelitian ini adalah mengembangkan metode analisis KCKT dengan detektor UV. Fase diam (kolom) yang digunakan adalah octadecyl silane (ODS) 250 x 4,6 mm, ukuran partikel 10 μm, fase gerak bufer fosfat 0,025 molar pH 2,5 dan asetonitril dengan perbandingan tertentu (dioptimasi), kecepatan alir tertentu (dioptimasi), dan deteksi pada 295 nm, dengan standar internal ciprofloxacin. Metode hasil optimasi selanjutnya di validasi beberapa parameternya antara lain: selektivitas, akurasi, presisi, keterulangan, linieritas, LOD, LOQ, dan kesesuaian sistem. Parameter KCKT hasil optimasi adalah sebagai berikut : kolom octadecyl silane (ODS) 250 x 4,6 mm, ukuran partikel 10 μm, fase gerak bufer fosfat 0,025 molar pH 2,5 dan asetonitril dengan perbandingan (85 : 15), kecepatan alir 1,2 ml/menit. Hasil uji selektivitas Rs ≥ 1,5, uji keterulangan yang baik dengan koefisien variasi < 2%, linieritas diperoleh pada rentang 0,1-5 μg/ml, dengan nilai koefisien korelasi (r) = 0,9994-0,9998. Nilai LOD berdasarkan rasio luas area dan tinggi puncak kromatogram adalah 0,0275 μg/ml dan 0,0275 μg/ml, nilai LOQ berdasarkan rasio luas area dan tinggi puncak kromatogram adalah 0,092 μg/ml dan 0,092 μg/ml. Persen recovery pada hari yang sama dan antar hari berturutturut adalah 94,42-109,38% dan 95,70-108,83%, serta presisi KV (%) berturutturut 0,52-2,90% dan 0,93-2,47%. Hasil uji kesesuaian sistem terhadap waktu retensi, rasio luas dan tinggi puncak kromatogram menunjukkan KV < 2%. Berdasarkan data tersebut, dapat disimpulkan bahwa metode yang digunakan cukup spesifik dan sensitif untuk menetapkan kadar levofloxacin dalam plasma darah manusia.

Levofloxacin is a more potent fluoroquinolone than ofloxacin. The common analytical method employed is HPLC spectrometry fluorimetri, until now no method reported to determine levofloxacin in human plasma using SPE (solid phase extraction) and its quantification using HPLC with UV detector. However in most laboratory available instrument is HPLC–UV, the aim of this research is to develop an analytical method to determine levofloxacin in human plasma using SPE technique and HPLC with UV detector The stationary phase was octadecyl silane (ODS) column 250 x 2.6 mm (particle size 10 μm), whereas mobile phase the mixture of phosphat buffer 0.025 molar pH 2.5 and acetonitril with optimized ratio, flow rate was optimized, the UV detection at 295 nm, and internal standard used was ciprofloxacin. Optimized method was validated on the bases of selectivity, accuracy, precision, repeatability, linearity, LOD, LOQ, and system suitability. The optimum HPLC parameters obtained were octadecyl silane (ODS) 250 x 4.6 mm, particel size 10 μm, phosphat buffer 0.025 M, pH 2.5 and acetonitril with ratio (85:15) as mobile phase, and flow rate 1.2 ml/minute. The result of selectivity Rs >1.5, repeatability expressed by its variation coefficient < 2%, quantitation by internal standardization method using ciprofloxacin as internal standard, analytical parameters of linearity range 0.1-5 μg/ml was obtained, due to it’s r = 0.9994-0.9998, LOD of peak area and peak height chromatogram ratio were 0.0275 μg/ml and 0.0275 μg/ml, LOQ of peak area and peak height chromatogram ratio were 0.092 μg/ml and 0.092 μg/ml, intra-day and inter-day percent recovery was 94.42-109.38 and 95.70-108.83, intra-day and inter-day precision (% CV) 0.52-2.90 and 0.93-2.47, and system suitability from retention time, peak area and peak height chromatogram ratio which their CV < 2%. According to result of experimental data above this analysis method is sensitive enough for determination of levofloxacin in human plasma.

Kata Kunci : Antibiotika, Levofloxacin, Analisis KCKT, Plasma Darah HPLC, Levofloxacin, SPE, Human Plasma.