Efek antikarsinogenesis ekstrak etanolik daun Gynura procumbens (Lour) Merr pada mukosa lidah tikus Sprague Dawley yang diinduksi 4 Nitroquinoline 1-oxide

AGUSTINA, Dewi, Promotor Prof.drh. R. Wasito, M.Sc.,Ph.D

2007 | Disertasi | S3 Ilmu Kesehatan

Efek samping dan biaya yang relatif mahal untuk terapi kanker, mendorong masyarakat beralih pada pengobatan tradisional herbal. Daun dari tanaman G. procumbens (Lour) Merr (Ind: Sambung Nyawa) telah banyak digunakan oleh masyarakat Indonesia untuk pengobatan penyakit kanker. Efek antikanker maupun antikarsinogenesis daun G. procumbens telah banyak dibuktikan melalui penelitian in vitro dan in vivo pada berbagai jenis sel. Efek antikanker maupun antikarsinogenesis daun G. procumbens diduga melalui senyawa flavonoid yang dikandungnya. Mengingat etiologi yang berbeda untuk setiap jenis karsinogenesis kemungkinan akan memberikan mekanisme molekuler yang berbeda, akibatnya untuk setiap jenis karsinogenesis belum tentu memberikan efek penghambatan yang sama. Tujuan penelitian ini untuk mengkaji efek antikarsinogenesis mulut ekstrak etanolik daun G. procumbens, mekanisme aksinya dalam menghambat karsinogenesis mulut serta dosis penghambatannya. Sembilan puluh dua tikus putih Sprague Dawley jantan berumur 3 minggu dibagi dalam 11 kelompok penelitian. Kelompok I, IV, VII sebagai kontrol positif 4NQO, kelompok II, V, VIII untuk melihat efek preventif ekstrak etanolik daun G. procumbens, dan kelompok III, VI, IX untuk melihat efek profilaksisnya. Kelompok X dan XI sebagai kontrol positif ekstrak etanolik G. procumbens dan kontrol negatif. Tikus putih diinduksi 4NQO pada mukosa dorsal lidah dalam durasi yang berlainan (8, 16 atau 24 minggu) bersamaan atau diikuti dengan pemberian ekstrak etanolik daun G. procumbens atau hanya diinduksi 4NQO saja. Pada akhir minggu ke-36 dilakukan pemeriksaan patologis anatomis, histopatologis (H&E) dan analisis imunohistokimiawi dengan metode labelled streptavidin biotin untuk mendeteksi ekspresi Ki-67 (untuk mengkaji efek antikarsinogenesis mulut ekstrak etanolik daun G. procumbens) dan untuk mendeteksi ekspresi P53, P21^WAF1, GADD45 dan aktivitas PARP (untuk mengkaji mekanisme aksi ekstrak etanolik daun G. procumbens dalam menghambat karsinogenesis mulut). Hasil penelitian menunjukkan bahwa, ekstrak etanolik daun G. procumbens berefek preventif dan profilaksis fase inisiasi karsinogenesis mulut pada dosis yang dipergunakan pada kelompok II dan III. Hal ini dibuktikan dengan adanya pengurangan insidensi karsinoma sel skuamosa lidah sebesar 66,7% dan 75% pada kelompok II dan III. Mekanisme aksi ekstrak etanolik daun G. procumbens dalam menghambat karsinogenesis mulut dilakukan dengan menginduksi ekspresi P21^WAF1 pada jalur yang tergantung wt P53. Hal ini terbukti dengan adanya ekspresi P21^WAF1 pada jaringan yang tidak mengekspresikan P53 pada seluruh kelompok penelitian. Dari analisis ekspresi GADD45 dan aktivitas PARP tampak bahwa, imunoreaktivitas GADD45 dan aktivitas PARP terutama terdeteksi pada lapisan keratin pada semua kelompok penelitian. Hasil tersebut mengindikasikan bahwa, ekstrak etanolik daun G. procumbens tidak dapat menginduksi perbaikan DNA akibat induksi 4NQO pada model yang digunakan. Dari penelitian ini disimpulkan bahwa, ekstrak etanolik daun G. procumbens dapat menghambat karsinogenesis mulut melalui efek preventif dan profilaksis pada fase inisiasi dengan menginduksi ekspresi P21^WAF1 yang tergantung wt P53.

Unfavorable effects and expensive cost related to cancer treatment makes people are getting back to the use of traditional herbal medicines. G. procumbens (Ind : Sambung Nyawa) leaves have been used by Indonesian to treat cancers. Anticancer and anticarcinogenesis effects of G. procumbens leaves have been evidenced via in vitro and in vivo studies in many kinds of cell. These effects were especially produced from flavonoid content in the leaves. In light of different etiology for each carcinogenesis leads to different molecular mechanism, it makes inhibitory effect of G. procumbens for each carcinogenesis may not the same. The aims of this study are to investigate the anticarcinogenesis effect of the ethanolic extract of G. procumbens leaves and to elucidate its inhibitory mechanism and dosage in oral carcinogenesis. Ninety two male Sprague Dawley rats aged 3 weeks were divided into 11 groups. Groups I, IV, VII were used as positive control for 4NQO, groups II, V, VIII were used to investigate the preventive effect of the ethanolic extract of G. procumbens leaves and groups III, VI, IX were used to investigate the prophylactic effect of the ethanolic extract of G. procumbens leaves. Group X and XI were used as positive control for the ethanolic extract of G. procumbens and negative control, respectively. The rats were lingually induced by 4NQO in variety durations (8, 16 or 24 weeks) with simultaneously administration of the extract or were followed by the administration of the extract or the rats were induced by 4NQO only. At the end of the 36th week, pathology anatomical, histopathological (H&E) and expression of Ki-67 (using labelled streptavidin biotin, LSAB, method) examinations were performed in the dorsal surface of the tongue to investigate the anticarcinogenic effect of the ethanolic extract of G. procumbens leaves in oral carcinogenesis. Then, immunohistochemical analyses by using LSAB method were carried out as well to detect the expression of P53, P21^WAF1 , GADD45 and PARP to elucidate the anticarcinogenic mechanism of the ethanolic extract of G. procumbens leaves in oral carcinogenesis. The results showed that the ethanolic extract of G. procumbens leaves had the preventive and prophylactic effects in the initiation phase of oral carcinogenesis with the dosages of G. procumbens as used in groups II and III. This statement was evidenced by the reduction of tongue squamous cell carcinoma incidence up to 66,7% and 75% in groups II and III, respectively. Inhibitory mechanism of the ethanolic extract of G. procumbens leaves in oral carcinogenesis was undertaken by inducing P21^WAF1 expression dependently wt P53. This mechanism was demonstrated by the expression of P21^WAF1 in tissues which P53 expression was not found. The immunoreactivity of GADD45 and the activity of PARP especially were detected in keratinized layer in all groups of rat. The latter result indicated that the ethanolic extract of G. procumbens leaves could not induce DNA repair in model used. From these results, it is apparent that the ethanolic extract of G. procumbens leaves could inhibit oral carcinogenenesis through its preventive and prophylactic effects in initiation phase by inducing P21^WAF1 expression dependently wt P53.

Kata Kunci : Kanker Mulut,Antikarsinogenesis,Daun Gynura Procumbens (Lour) Merr, Oral Cancer, anti carcinogenesis