Produksi dan uji aktivitas o-Endotoksin dari Bacillus thuringiensis subspesies Israelinsis serotipe H-14 sebagai Bioinsektisida pada Musca domestica dan Stomoxys calcitrans

SUNARSO, Agus, drh. Kurniasih, MV.Sc.,Ph.D

2006 | Tesis | S2 Sain Veteriner

Penelitian ini bertujuan untuk meningkatkan kemampuan hidup dan sporulasinya untuk menghasilkan protein spesifik yang berfungsi sebagai insektisida pada beberapa spesies larva Lalat. Karakterisasi protein δ-endotoksin dari Bacillus thuringiensis subspesies israelensis H-14 melalui separasi gel elektroforesis untuk menentukan protein berdasarkan berat molekulnya. Protein δ-endotoksin dihasilkan dari Bacillus thuringiensis Subspesies israelensis H-14 pada saat bakteri tersebut mengalami fase sporulasi, protein tersebut mempunyai kemampuan untuk membunuh beberapa larva dari ordo Lipedoptera dan Diptera, khususnya Lalat. Bakteri dan δ-endotoksinnya apabila terendositosis oleh larva lalat maka sel epithelium usus akan mengalami kerusakan. Isolat Bacillus thuringiensis Subspesies israelensis H-14 didapatkan dalam bentuk sheat kristal kering dari Koppert Canada Limited dengan kode produksi Bt. PS18750. Isolat dibiakkan pada medium pertumbuhan untuk mengaktifkan kembali proses biokimiawi dan perkembang - biakan sel. Protein δ-endotoksin dihasilkan pada saat bakteri tersebut mengalami fase sporulasi, lalu dilakukan isolasi dari medium dan dipurifikasi dengan ammonium sulfat jenuh. Hasil isolasi diidentifikasi dan dikarakterisasi dengan SDS-Page. Hasil elektroforesis dilanjutkan dengan elusi protein tersebut untuk mendapatkan protein spesifik. Protein spesifik δ-endotoksin siap dipakai sebagai bahan uji aktivitas pada beberapa larva Lalat yaitu Musca domestica, dan Stomoxys calcitrans. Hasil yang diperoleh ditemukan profil protein Whole bakteri Bacillus thuringiensis Subspesies Israelensis sebesar 103, 90, 78, dan 57 kDa dan profil protein hasil presipitasi sebesar 103, 90, 78, 57, 53, 44 dan 33 kDa. Telah ditemukan profil tunggal protein δ-endotoksin sebesar 103 kDa yang diduga mempunyai aktivitas insektisidal. Uji aktivitas whole bakteri pada larva Musca domestica dan larva Stomoxys calcitrans menunjukkan konsentrasi 107 adalah paling optimal. Sedangkan pada uji aktivitas δ-Endotoksin menunjukkan konsentrasi 400 μg adalah yang paling optimal. Didapatkan perbedaan yang nyata pengaruh pemberian whole bakteri terhadap kematian lalat dewasa Musca domestica dan Stomoxys calcitrans.

This research aims to increase alive ability and sporulasi to produce protein specific that functioned as insecticide in several fly larvas species. Characterization protein δ-endotoksin from Bacillus thuringiensis subspesies israelensis H-14 pass separation gel elektroforesis to determine protein based on heavy the molecule. Protein δ-endotoksin produced from Bacillus thuringiensis subspesies israelensis H-14 at the time of bacteria experience phase sporulasi, protein has ability to kill several larvas from order Lipedoptera and Diptera, especially fly. Bacteria and δ-endotoksin when endocytosis by fly larva so cell epithelium intestines experience damage. Isolate Bacillus thuringiensis subspesies israelensis H-14 got in the form of sheat dry crystal from koppert Canadian limited with production code Bt. PS18750. Isolat cultivated in medium growth to activate to return process biochemistry and cell breeding. Protein δ-endotoksin produced at the time of bacteria experience phase sporulasi, then done isolation from medium and purified with satisfied ammonium sulphate. Isolation result is identified and characterized with SDS-PAGE. Result elektroforesis continued with elusi protein to get protein specific. Protein specific δ- endotoksin ready worn upon which activity test in several fly larvas that is Musca domestica, and Stomoxys calcitrans. Result that got found profile protein whole bacteria Bacillus thuringiensis subspesies israelensis as big as 103,90,78, and 57 kDa and profile protein result presipitasi as heavy as 103,90,78,57,53,44 and 33 kDa found single profile protein δ- endotoksin as heavy as 103 kDa that guessed has activity insektisidal. Activity test whole bacteria in larva Musca domestica and larva Stomoxys calcitrans show concentration 107 optimalest. while in activity test δ-endotoksin show concentration 400 μg optimalest. This is got gift influence a marked difference whole bacteria towards adult fly death Musca domestica and Stomoxys calcitrans.

Kata Kunci : Insektisida,Larva Lalat,Protein ,Endotoksin,Bti, Bacillus thuringiensis, Protein δ-endotoksin, Musca domestica, Stomoxys calcitrans, Elektroforesis, SDS-Page