Aktivitas senyawa hasil isolasi akar pasak bumi (Eurycoma longifolia Jack) asal kawasan hutan Kalimantan Barat terhadap fagositosis makrofag in vitro

WAHYUNI, Dinar Sari Cahyaningrum, Dr. Subagus Wahyuono, M.Sc.,Apt

2006 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Akar pasak bumi (Eurycoma longifolia Jack) telah banyak diteliti memiliki aktivitas sitotoksik terhadap sel kanker. Kemampuan melawan kanker pada akar pasak bumi disamping karena efek toksik dari senyawa-senyawa kimia yang terkandung dapat juga karena kemampuan untuk meningkatkan sistem imun (imunostimulan). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas fagositosis makrofag senyawa hasil isolasi akar pasak bumi sebagai tolok ukur imunostimulan. Serbuk dimaserasi dengan kloroform diikuti oleh metanol. Ekstrak kloroform (aktif BST) dipartisi dengan metanol 70% diperoleh fraksi larut dan fraksi tidak larut. Fraksi larut difraksinasi dengan kromatografi cair vakum menggunakan fase diam silika gel dan fase gerak bertingkat. Fraksi aktif yang diperoleh, diisolasi dengan KLT preparatif dan uji kemurniannya menggunakan tiga sistem fase gerak serta dianalisis menggunakan spektra UV, IR, dan MS. Uji fagositosis makrofag yang diisolasi dari peritoneum mencit in vitro dilakukan menurut metode Leijh et al. (1986). Perhitungan jumlah makrofag yang memfagositosis lateks dan jumlah lateks yang mampu difagositosis oleh 100 makrofag dilakukan dengan uji Kolmogorov-Smirnov, uji ANOVA satu arah, uji LSD dengan tingkat kepercayaan 95% dan Uji- T. Hasil penelitian menunjukkan bahwa diperoleh dua isolat senyawa aktif, yaitu PB1 dan PB2. Uji fagositosis makrofag terhadap lateks menunjukkan bahwa PB1 mampu meningkatkan aktivitas fagositosis makrofag secara signifikan (p<0,05) dan optimum pada konsentrasi 5 μg/ml sebesar 92% sedangkan kontrol positif (Imboost®) sebesar 12% (5 μg/ml). PB2 mampu meningkatkan aktivitas fagositosis makrofag secara signifikan (p<0,05) dan optimum pada konsentrasi 0,2 μg/ml sebesar 44,19% sebanding dengan kontrol positif (Imboost®) pada konsentrasi 100 μg/ml (46,51%). Hasil spektra PB1 dan PB2 menunjukkan adanya ikatan rangkap terkonjugasi, dan memiliki gugus fungsional (C=O ester, - CH2-, -CH3, dan -C-O-) dengan [M]+ 192 dan [M]+ 279. Penelitian ini dapat disimpulkan bahwa PB1 dan PB2 yang diisolasi dari akar pasak bumi mampu meningkatkan aktivitas fagositosis makrofag in vitro secara signifikan (p<0,05) dan memiliki ikatan rangkap terkonjugasi, gugus fungsional (C=O ester, -CH2-, -CH3, dan -C-O-) dengan [M]+ 192 dan [M]+ 279.

Root of pasak bumi (Eurycoma longifolia Jack) had been known having cytotoxic activity against cancer cells. This activity was caused by toxic effect from its chemical compounds and its ability to enhance immune system (immunostimulant). Therefore, the aim of this study was to determine the phagocyte macrophage as standard measurement immunostimulant activity of isolated compounds from the root of pasak bumi. Research was conducted by using chloroform and methanol to extract root of pasak bumi. Then, chloroform extract was partitioned using methanol 70% to give soluble methanol 70% fraction and insoluble methanol 70% fraction. Soluble methanol 70% fraction was separated further by Vacuum Liquid Chromatography using silica as stationary phase and gradient solvent as mobile phase. Active compounds were isolated by preparative thin layer chromatography. Its purity were tested by three solvent system and identified using spectroscopy UV, IR, and MS. Phagocytic study was conducted as discribed by Leijh (latex phagocyte macrophage in vitro). Macrophage was isolated from rat’s peritoneal. The statistic of percentage of latex phagocyte macrophage were Kolmogorov-Smirnov test, ANOVA one way test, LSD test (p <0.05) and T-test. This study provided two active compounds were PB1 and PB2. Phagocytic study showed that PB1 could enhance phagocyte activities of macrophage significantly (p<0.05) and optimum at 5 μg/ml (92%) while positive control (Imboost®) was 12% (5 μg/ml). PB2 showed enhancement in phagocyte activities of macrophage significantly (p<0.05) and optimum at 0.2 μg/ml (44.19%) and positive control (Imboost®) at 100 μg/ml (46.51%). PB1 and PB2 had conjugated double bond, functional group (C=O ester, -CH2-, -CH3, dan -C-O-) with [M]+ 192 and [M]+ 279. Based on those data, it was concluded that PB1 and PB2 were isolated from the root of pasak bumi can enhance phagocyte activities of macrophage in vitro significantly (p<0.05) and had conjugated double bond, functional group (C=O ester, -CH2-, -CH3, dan -C-O-) with [M]+ 192 and [M]+ 279.

Kata Kunci : Akar Pasak Bumi,Fagositosis Makrofag,Imunostimulan