Isolasi dan identifikasi struktur senyawa bioaktif dari spons laut Theonella sp. (Kode 03-IND-25) yang dikoleksi dari perairan Taman Nasional Laut Bunaken, Manado, Sulawesi Utara

KHIRLAN, Dr. Subagus Wahyuono, M.Sc.,Apt

2005 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Invertebrata laut telah diketahui menjadi salah satu sumber senyawa bioaktif yang penting dan memiliki potensi medis di samping tumbuhan dan hewan yang dijumpai di daratan. Meskipun belum ada obat terapetik yang dikembangkan berasal dari invertebrata laut, namun sejumlah senyawa dilaporkan telah memasuki tahap uji klinis sebagai obat anti kanker. Penelitian-penelitian yang dilakukan terhadap produk alam kelautan (marine natural products) dalam beberapa dekade belakangan ini telah menghasilkan penemuan berbagai senyawa yang menarik secara biologis dan kimiawi. Di antara berbagai invertebrata laut yang telah diteliti, spons laut diketahui memiliki kandungan senyawa bioaktif yang paling luas dan paling banyak mendapat perhatian para peneliti. Berbagai penelitian yang dilakukan terhadap spons laut telah menghasilkan senyawa-senyawa baru dengan struktur yang unik dan memiliki aktifitas farmakologis yang menarik. Hasil pengujian awal dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BST) terhadap ekstrak kasar kloroform spons laut yang dikoleksi dari perairan Taman Nasional Laut Bunaken menunjukkan bahwa spons laut Theonella sp. (kode 03-IND- 25) bersifat toksik terhadap larva udang Artemia salina (25 μg/mL, 100% kematian larva) sehingga terhadap spons tersebut perlu dilakukan penelitian lanjutan ke tahap isolasi dan elusidasi struktur senyawa aktifnya. Spons tersebut dimaserasi dengan pelarut aseton, kemudian dipartisi dengan kloroform dan air. Ekstrak kloroform yang merupakan ekstrak aktif difraksinasi dengan kromatografi cair hampa udara dengan fase gerak heksana, suatu campuran heksana-etil asetat dengan berbagai perbandingan, campuran kloroform-metanol, dan metanol. Masing-masing fraksi diuji sifat toksiknya dengan metode BST. Isolat aktif pada fraksi aktif dipisahkan dengan kromatografi lapis tipis preparatif sehingga diperoleh dua senyawa. Kedua senyawa tersebut juga diuji sitotoksisitasnya pada sel HeLa dan sel Raji. Senyawa aktif yang diperoleh bersifat toksik terhadap larva A. salina (LC50 0,41 ± 0,02 μg/mL), pada sel HeLa (IC50 23,31μg/mL) dan pada sel Raji (IC50 sebesar 25,93 μg/mL). Berdasarkan data spektrum UV, IR, MS, dan 1H-NMR serta penelusuran pustaka diperkirakan bahwa kedua senyawa tersebut merupakan senyawa polipeptida yang terdiri dari beberapa asam amino sebagai penyusunnya.

Marine invertebrates which known as a source of bioactive compounds from the sea have medicinal potential as plants and animals. Although there were no therapeutic drugs developed from marine invertebrates, until now several compounds reported have been tested for clinical trial as anticancer drugs. Research on marine natural products in a few decades resulted in the discovery of many interesting compounds having biological and chemical activities. Among the marine invertebrates, sponge has a wide range of chemical and biological activities. Various research on sponges give in new compounds which have unique structure and interesting pharmacology activities. Preliminary screening using Brine Shrimp Lethality Test (BST) on chloroform extract of sponge (03-IND-25) collected from Bunaken National Marine Park, showed that at lowest concentration (25 μg/mL) it caused 100% death of Artemia salina larvae. Further step of isolation and structure elucidation of the active compounds is then pursued. This study was aimed to isolate and identify active compounds from the sponge. The Sponge (03-IND-25) was macerated by acetone to give acetone extract. The dried acetone extract was then partitioned with chloroform to give chloroform extract and water as the residue containing salt. The BST active chloroform extract was fractionated by vacuum liquid chromatography with hexane, hexane-ethyl acetate, chloroform-methanol, and methanol as the mobile phase. Each fractions obtained was tested for its toxicity using BST method (25 μg/mL). Active compounds was isolated from the active fractions using preparative thin layer chromatography to give two toxic compounds. The two compounds was tested for its cytotoxicity against HeLa and Raji cells in vitro. The two compounds as a mixture was toxic toward A. salina (LC50 0.41 ± 0.02 μg/mL), HeLa cells (IC50 23.31μg/mL), and Raji cells (IC50 25.93 μg/mL). According to the spectroscopy data (UV, IR, MS, 1H-NMR) and literature, it can be concluded that the two compounds were indentified as polypeptides.

Kata Kunci : Obat Anti Kanker,Invertebrata Laut,Spons Laut,Sitotoksisitas, Theonella sp., cytotoxicity, polypeptide.