Deteksi Mutasi Fragmen Gen pfcrt Plasmodium Isolat Tombatu, Sulawesi Utara yang resisten terhadap klorokuin dengan analisis SSCP

TORUAN, Vera Madonna Lumban, Prof.dr. Supargiyono, DTM

2005 | Tesis | S2 Ilmu Kedokteran Tropis

Penyakit malaria sampai saat ini masih merupakan salah satu masalah kesehatan masyarakat di Indonesia. Salah satu kendala yang dihadapi dalam pemberantasannya adalah resistensi Plasmodium terhadap obat antimalaria. Sampai saat ini klorokuin masih digunakan secara luas dalam pengobatan malaria di Indonesia, sementara itu kasus resistensi P. falciparum terhadap klorokuin semakin banyak dilaporkan. Uji efikasi klorokuin dengan cara in vivo dan in vitro mempunyai banyak keterbatasan dan memakan waktu lama. Saat ini telah dilaporkan adanya mutasi gen pfcrt pada kodon 76 yang berhubungan erat dengan resistensi P. falciparum terhadap klorokuin. Tehnik analisis SSCP adalah metode molekuler yang dapat mendeteksi adanya perubahan susunan basa nukleotida dari suatu fragmen gen dengan cepat dan sensitif. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah analisis SSCP dapat digunakan untuk mendeteksi mutasi gen pfcrt pada isolat P. falciparum yang resisten terhadap klorokuin di Kecamatan Tombatu, Sulawesi Utara.. Sampel diambil dari darah penderita terinfeksi P. falciparum di Kecamatan Tombatu, Sulawesi Utara yang diuji secara in vivo selama 14 hari. Analisis SSCP dikerjakan pada ke-15 sampel dan dibandingkan dengan kontrol isolat P.falciparum sensitif klorokuin strain D10. Didapati 80% dari isolat resisten menunjukkan perbedaan pola migrasi dengan isolat kontrol yang mengindikasikan adanya mutasi pada isolat yang resisten. Perlu penelitian lebih lanjut dengan tehnik sekuensing untuk dapat mengetahui pasti perubahan basa nukleotida yang terjadi.

Malaria is still the major health problem in Indonesia. There are many obstacles in effort to controle malaria, one of them is the P. falciparum chloroquine resistant. Chloroquine is still widely used for malaria therapy in Indonesia, despite many resistancy cases reported in some area. In vivo and in vitro test for chloroquine efficacy have many difficulties and take much time. Mutation at the pfcrt gene at codon 76 lysin to threonine has been reported and been corelated with chloroquine resistancy,however such mutation in P. falciparum resistance to chloroquine in Tombatu subdistrict, North Sulawesi hasn’t been identified. SSCP is a rapid and sensitive molecular method that can be used to detect the nucleotide base change in a gene fragment. The aim of this study is to analyze wheter SSCP can be used to detect pfcrt gene mutation of P. falciparum chloroquine resistant from Tombatu subdistrict of North Sulawesi.. Blood samples were taken from P. falciparum chloroquine resistant and sensitive patient at Tombatu Health Centre, North Sulawesi determined by 14 days in vivo test. SSCP analysis were done for the 10 resistant and 5 sensitive samples. The result indicated that 80% of the resistant samples showed different migration pattern indicating the difference of their DNA conformation structure due to nucleotide mutation. More study needed to confirm this finding using sequencing method.

Kata Kunci : Malaria,Pengobatan Klorokuin,Mutasi Gen pfcrt,Analisis PCR SSCP