Efek Senyawa Hesperetin terhadap Ekspresi AKT melalui Ekspresi Total AKT dan Fosforilasi AKT (Ser473) pada Sel Koriokarsinoma secara In Vitro

Asri Damai Yanti, Prof. Dr. Mae Sri Hartati Wahyuningsih, M.Si., Apt, 2. Dr. Sci. Apt. Beni Lestari, S.Farm., M.Bio.Sci.,

2026 | Tesis | S2 Ilmu Kedokteran Dasar dan Biomedis

Latar belakang: Koriokarsinoma merupakan keganasan trofoblastik gestasional yang bersifat sangat agresif dan memiliki kemampuan metastasis yang tinggi. Jalur pensinyalan phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B (PI3K/AKT) berperan penting dalam regulasi proliferasi, kelangsungan hidup, dan resistensi apoptosis pada sel kanker. aktivasi jalur ini ditandai oleh fosforilasi AKT pada residu Ser473. Oleh karena itu, penghambatan fosforilasi AKT menjadi salah satu target potensial dalam pengembangan terapi antikanker. Hesperetin adalah senyawa flavonoid alami yang diketahui memiliki aktivitas antikanker, namun pengaruhnya terhadap aktivasi jalur PI3K/AKT pada sel koriokarsinoma masih belum banyak diteliti.

Tujuan: Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi efek senyawa hesperetin terhadap aktivasi jalur PI3K/AKT melalui inhibisi fosforilasi AKT (Ser473) pada sel koriokarsinoma secara in vitro.

Metode: Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental in vitro menggunakan sel koriokarsinoma (BeWo) dan sel normal (Vero). Sel diperlakukan dengan hesperetin pada berbagai konsentrasi. Uji viabilitas sel dilakukan menggunakan metode WST-8 assay dan MTT assay untuk menentukan nilai IC??. Pengaruh hesperetin terhadap aktivasi jalur PI3K/AKT dianalisis dengan mengukur tingkat fosforilasi AKT (Ser473) menggunakan metode western blot

Hasil: Hesperetin menurunkan viabilitas sel BeWo dengan nilai IC?? sebesar 261,59 µM pada 24 jam dan 241,09 µM pada 48 jam. Pada sel Vero, hesperetin menunjukkan nilai IC?? yang lebih tinggi, yaitu 3180 µM (IC?? hasil ekstrapolasi) pada 24 jam dan 285,28 µM pada 48 jam, sehingga diperoleh indeks selektivitas sebesar 12,15 (24 jam) dan 1,18 (48 jam). Analisis Western blot menunjukkan bahwa hesperetin menurunkan fosforilasi AKT pada residu Ser473 secara signifikan pada konsentrasi 125 µM selama 48 jam, tanpa memengaruhi ekspresi total AKT, yang mengindikasikan adanya penghambatan aktivasi jalur PI3K/AKT melalui mekanisme penghambatan fosforilasi.

Kesimpulan: Senyawa hesperetin menunjukkan efek sitotoksik lemah terhadap sel koriokarsinoma (BeWo) maupun sel normal (Vero). Namun demikian, hesperetin tidak menunjukkan selektivitas yang tinggi terhadap sel BeWo dibandingkan dengan sel Vero. Pada konsentrasi 125 µM selama 48 jam, hesperetin mampu menurunkan ekspresi fosforilasi AKT (Ser473) secara signifikan pada sel BeWo. Sebaliknya, pada konsentrasi 150 µM selama 24 jam dan 125 µM selama 48 jam, hesperetin tidak memengaruhi ekspresi total protein AKT pada sel BeWo.

Kata kunci: Flavonoid; Hesperetin; Sitotoksisitas; PI3K/AKT; Koriokarsinoma

Background: Choriocarcinoma is a highly aggressive gestational trophoblastic malignancy with a strong metastatic potential. The phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B (PI3K/AKT) signaling pathway plays a critical role in the regulation of cell proliferation, survival, and resistance to apoptosis in cancer cells. Activation of this pathway is characterized by phosphorylation of AKT at the Ser473 residue. Consequently, inhibition of AKT phosphorylation has emerged as a potential target for anticancer therapy. Hesperetin is a naturally occurring flavonoid that has been reported to exhibit anticancer activity; however, its effects on PI3K/AKT pathway activation in choriocarcinoma cells remain poorly understood.

 

Objective: This study aimed to evaluate the effect of hesperetin on PI3K/AKT pathway activation through inhibition of AKT phosphorylation at Ser473 in choriocarcinoma cells in vitro.

 

Methods: This study was conducted as an in vitro experimental study using choriocarcinoma (BeWo) cells and normal (Vero) cells. The cells were treated with hesperetin at concentrations ranging from 0 to 300. Cytotoxic effects were evaluated using WST-8 and MTT assays to determine the IC?? values. The effect of hesperetin on PI3K/AKT pathway activation was assessed by measuring the levels of AKT phosphorylation at Ser473 and total AKT expression using Western blot analysis.

 

Results: Hesperetin reduced BeWo cell viability with IC?? values of 261.59 µM at 24 hours and 241.09 µM at 48 hours. In Vero cells, higher IC?? values were observed, namely 3180 µM (extrapolated IC??) at 24 hours and 285.28 µM at 48 hours, resulting in selectivity indices of 12.15 (24 hours) and 1.18 (48 hours). Western blot analysis demonstrated that hesperetin significantly reduced AKT phosphorylation at the Ser473 residue at a concentration of 125 µM after 48 hours, without affecting total AKT expression, indicating inhibition of PI3K/AKT pathway activation through suppression of AKT phosphorylation.

 

Conclusion: Hesperetin exhibited cytotoxic effects on both choriocarcinoma (BeWo) cells and normal (Vero) cells. However, hesperetin did not demonstrate high selectivity toward BeWo cells compared to Vero cells. At a concentration of 125 µM for 48 hours, hesperetin significantly reduced the expression of phosphorylated AKT (Ser473) in BeWo cells. In contrast, hesperetin at concentrations of 150 µM for 24 hours and 125 µM for 48 hours did not affect the expression of total AKT protein in BeWo cells

 

Keywords: Flavonoids; Hesperetin; Cytotoxicity; PI3K/AKT; Choriocarcinoma

Kata Kunci : Flavonoid, Hesperetin, Sitotoksisitas, PI3K/AKT, Koriokarsinoma