AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL DAUN KITOLOD (Isotoma longiflora (L.) C. Presl) DALAM PENYEMBUHAN ULKUS DIABETIK MELALUI MEKANISME ANTIINFLAMASI DAN PROLIFERASI SEL: Studi Terintegrasi In Silico, In Vitro, dan In Vivo

Happy Elda Murdiana, Prof. Dr. apt. Zullies Ikawati

2026 | Disertasi | S3 Ilmu Farmasi

Ulkus diabetes ditandai oleh inflamasi persisten yang menghambat transisi ke fase proliferasi dan menyebabkan kegagalan regenerasi jaringan. Penekanan inflamasi secara dini menjadi prasyarat untuk mengaktifkan proliferasi dan angiogenesis dalam penyembuhan ulkus. Penelitian ini bertujuan untuk mengungkap mekanisme molekuler ekstrak etanol daun kitolod (EEDK) dalam mempercepat penutupan ulkus Diabetes Mellitus (DM) melalui pendekatan terintegrasi in silico, in vitro, dan in vivo.

Penelusuran kandungan fitokimia EEDK dilakukan menggunakan metode LC-HRMS dan penetapan kadar lobelin dilakukan menggunakan KLT densitometri. Analisis in silico dilakukan melalui network pharmacology untuk menentukan target protein kunci dan molecular docking untuk mengevaluasi afinitas ikatan. Uji in vitro menggunakan sel HaCaT pada kondisi hiperglikemia dengan parameter proliferasi serta migrasi sel pada 2 4 dan 48 jam, pengukuran kadar TNF-?, IL-6, VEGF-A, TGF-?, MMP-9, dan TIMP-1 (ELISA) serta ekspresi AKT-1, HIF-1?, dan VEGF-A (Western blot) dilakukan pada jam ke-6 setelah perlakuan untuk menangkap respons molekuler fase awal. Uji in vivo dilakukan pada tikus DM terinduksi streptozotocin (STZ) untuk mengevaluasi kecepatan penutupan ulkus, penurunan jumlah sel inflamasi, kecepatan re-epitelisasi, dan deposisi kolagen.

Hasil penelitian menunjukkan EEDK mengandung senyawa lobelin, asam kafeat,asam siringat dan asam ferulat yang berpotensi sebagai penyembuh luka DM. Lobelin merupakan senyawa dominan dengan kadar 0,947?lam ekstrak dan 0,0023?lam simplisia. Analisis in silico mengidentifikasi AKT-1, MAPK3, dan HIF-1? sebagai protein kunci, dengan afinitas ikatan lobelin terhadap AKT-1 lebih rendah dibandingkan vildagliptin dan sitagliptin. Secara in vitro, EEDK meningkatkan proliferasi secara signifikan pada seluruh konsentrasi (125-0,98ppm) (p<0 p=0,0491). p=0,0022; p=0,0009) p=0,0006; p=0,0005). p=0,0050), p=0,0486); p=0,0431) p=0,0003). p=0,0095)>

Diabetic ulcers are characterized by persistent inflammation that inhibits the transition to the proliferative phase and leads to tissue regeneration failure. Early suppression of inflammation is a prerequisite for activating proliferation and angiogenesis in ulcer healing. This study aims to uncover the molecular mechanism of ethanolic extract of kitolod leaves (EEDK) in accelerating the closure of diabetic ulcers through an integrated in silico, in vitro, and in vivo approach.

The phytochemical content of EEDK was investigated using the LC-HRMS method, and lobeline levels were determined using TLC densitometry. In silico analysis was performed using network pharmacology to identify key protein targets and molecular docking to evaluate binding affinity. In vitro tests using HaCaT cells under hyperglycemic conditions, with cell proliferation and migration parameters measured at 24 and 48 hours. TNF-?, IL-6, VEGF-A, TGF-?, MMP-9, and TIMP-1 levels were measured (ELISA), and AKT-1, HIF-1?, and VEGF-A [removed]Western blot) were measured at 6 hours after treatment to capture the early phase of molecular responses. In vivo tests were conducted on streptozotocin (STZ)-induced diabetic rats to evaluate the rate of ulcer closure, reduction in inflammatory cell count, re-epithelialization rate, and collagen deposition.

The results showed that EEDK contains lobeline, caffeic acid, syringic acid, and ferulic acid, which have potential as diabetic wound healing agents. Lobeline was the dominant compound, with concentrations of 0.947% in the extract and 0.0023% in the crude drug. In silico analysis identified AKT-1, MAPK3, and HIF-1? as key proteins, with lobeline having a lower binding affinity for AKT-1 than vildagliptin and sitagliptin. In vitro, EEDK significantly increased proliferation at all concentrations (125-0.98 ppm) (p<0 p=0.0491). p=0.0022; p=0.0009) p=0.0006; p=0.0005). p=0.0050), p=0.0486); p=0.0431) p=0.0003). p=0.0095)>

Kata Kunci : ulkus diabetik, anti-inflamasi, angiogenesis, migrasi sel, sel HaCaT, re-epitelisasi, deposisi kolagen