Efek Sitotoksik, Apoptosis dan Antiproliferasi ekstrak etanol biji Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa Scheff. Boerl) pada sel kanker colon WiDr

RIASTITI, Yudanti, dr. Rina Susilowati, Ph.D

2005 | Tesis | S2 Ilmu Kedokteran Dasar dan Biomedis

Latar Belakang : Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl) adalah tanaman obat yang secara empiris telah digunakan untuk mengobati penyakit kanker, tetapi belum banyak data ilmiah yang mendukung. Biji Mahkota Dewa diketahui memiliki efek sitotoksik terbesar Tujuan : Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek sitotoksik dan penghambatan proliferasi ekstrak etanol biji mahkota dewa pada sel kanker colon WiDr in vitro dan mengetahui apakah efek sitotoksiknya terjadi melalui pengaktifan program apoptosis. Metode: Uji aktivitas sitotoksik ekstrak etanol biji Mahkota Dewa dilakukan dengan memberikan enam dosis bahan uji pada sel kanker colon WiDr yang kemudian diinkubasikan selama 24 dan 48 jam. Penghitungan sel dilakukan setelah pewarnaan trypan blue. Apoptosis diamati dengan menggunakan metode TdT mediated x-dUTP nick and labeling (TUNEL), setelah sel diinkubasikan selama 48 jam. Persentase apoptosis dihitung tiap 100 sel. Aktivitas penghambatan proliferasi diamati setelah sel kanker colon WiDr diinkubasikan dengan tiga dosis dibawah IC50 bahan uji selama 24, 48 dan 72 jam. Setelah dilakukan penghitungan sel, hasilnya dianalisis dengan regresi linear untuk menentukan nilai doubling time. Hasil : Ekstrak etanol biji Mahkota Dewa mempunyai efek sitotoksik dengan nilai IC50 sebesar 41,31mg/mL pada inkubasi 24 jam dan 22,7 mg/mL pada inkubasi 48 jam, sedangkan IC50 5-Fluorouracil (5-FU) adalah 191,87 mg/mL pada inkubasi 24 jam dan 46,56mg/mL pada inkubasi 48 jam. Ditemukan sel TUNEL + pada kelompok perlakuan. Analisis Korelasi-Regresi menunjukkan ada hubungan yang erat antara prosentase apoptosis dan prosentase penghambatan. Ekstrak etanol biji Mahkota Dewa memperpanjang doubling time dari 26,5 jam pada kelompok kontrol menjadi 73,77 jam pada konsentrasi 15,625 mg/mL, 44,94 jam pada konsentrasi 7,813 mg/mL dan 34,05 jam pada konsentrasi 3,965 mg/mL. Nilai doubling time 5- FU pada konsentrasi 15,625 mg/mL adalah 118,02 jam, konsentrasi 7,813 mg/mL 83,88 jam sedangkan konsentrasi 3,965 mg/mL 62,36 jam. Kesimpulan : Ekstrak etanol biji Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl) bersifat sitotoksik dengan mengaktifkan program apoptosis pada sel kanker colon WiDr dan dapat menghambat proliferasi sel kanker colon WiDr.

Background: Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl) seed is one of the herbal medicine empirically has been used for cancer treatment, but until now there is no supportive scientific evidence on this. Mahkota Dewa seed is known to have the greatest cytotoxic effect. Objective: The aim of this study is to find out the cytotoxic and proliferative inhibition activity of the ethanol extract of Mahkota Dewa seed on colon cancer cell line WiDr in vitro and to investigate whether the cytotoxic effect is achieved through apoptosis. Method: Cytotoxic activity assay of the ethanol extract of Mahkota Dewa seed was done by incubating 6 doses of test compounds on colon cancer cell line WiDr for 24 and 48 hours and counted using trypan blue exclusion method. Apoptotic effect was investigated using TdT mediated x-dUTP nick end labeling (TUNEL) assay, after 48 hours. Apoptotic cells were counted in every 100 cells. Proliferative inhibition activity was investigated after incubation with three doses under IC50 of test compound for 24, 48 and 72 hours and counted using triphan blue exclusion method. The result was analyzed with linear regression to determine the doubling time. Results: The ethanol extract of Mahkota Dewa seed has cytotoxic effect with the IC50 41,31 mg/mL (24 hours) and 22,7 mg/mL (48 hours), while IC50 of Fluouracil (5-FU) is 191,87mg/mL (24 hours) and 46,56 mg/mL (48 hours). TUNEL + cells were observed in group with test compound. Regression-Correlation analysis show close correlation between apoptotic percentage and inhibition percentage. The ethanol extract of mahkota dewa seed prolonged WiDr cells doubling time from 26, 5 hours in control group to 73,77 hours at 15,625mg/mL, to 44,94 hours at 7, 813mg/mL and to 62,36 hours at 3,965 mg/mL, while 5-FU prolonged its doubling time from 26, 5 hours to 118,02 hours at 15,625mg/mL, to 83,88 hours at 7, 813mg/mL and to 34,05 hours at 3,965 mg/mL. Conclusion: The ethanol extract of Mahkota Dewa seed (P. macrocarpa (Scheff.) Boerl) has cytotoxic effect on colon cancer cell line WiDr through apoptosis and inhibits its proliferative activity .

Kata Kunci : Penyakit Kanker,Pengobatan,Biji Mahkota Dewa, Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl, Mahkota Dewa, citotoxic, proliferative, apoptosis, colon cancer.