Kumarin 8-Hidroksiisokapnolakton-2',3'-Diol dari daun Micromelum minutum :: Aktivitas sitotoksik dan efeknya terhadap apoptosis dan ekspresi Bcl-2 sel mieloma

YASMINA, Alfi, Dr.Drs. Mustofa, M.Kes.,Apt

2005 | Tesis | S2 Ilmu Kedokteran Dasar dan Biomedis

Latar Belakang: Mieloma multipel mulai menunjukkan resistensi terhadap kemoterapi setelah beberapa lama diterapi, dan salah satu penyebabnya adalah adanya overekspresi Bcl-2. Beberapa kumarin terbukti mempunyai aktivitas sitotoksik , dan salah satu kumarin, yaitu imperatorin, menimbulkan apoptosis dengan menghambat ekspresi Bcl-2 pada sel kanker. Kumarin 8-hidroksiisokapnolakton-2',3'-diol, yang diisolasi dari daun Micromelum minutum, menunjukkan aktivitas sitotoksik terhadap beberapa sel kanker. Kumarin ini diharapkan menunjukkan kemampuan yang sama terhadap sel mieloma. Tujuan: Mengetahui apakah kumarin 8-hidroksiisokapnolakton-2',3'-diol mempunyai aktivitas sitotoksik terhadap sel mieloma dan apakah efek sitotoksik itu ditimbulkan melalui apoptosis dengan melakukan penghambatan ekspresi Bcl-2. Metode: Uji sitotoksik kumarin 8-hidroksiisokapnolakton-2',3'-diol dilakukan pada kultur sel mieloma NS-1, dengan metode trypan blue exclusion assay, untuk masa inkubasi 24, 48, dan 72 jam. Uji apoptosis dilakukan dengan pemberian fluorokrom etidium bromida dan acridin orange pada sel mieloma yang sudah diinkubasi dengan kumarin tersebut selama 24 jam, lalu diperiksa dengan mikroskop fluoresensi. Uji ekspresi Bcl-2 dilakukan pada sel mieloma yang telah diinkubasi selama 24 jam dengan kumarin tersebut, dengan metode imunohistokimia menggunakan antibodi terhadap Bcl-2. Doksorubisin digunakan sebagai kontrol positif pada uji sitotoksik dan apoptosis. Hasil: Kumarin 8-hidroksiisokapnolakton-2',3'-diol mempunyai efek sitotoksik terhadap sel mieloma NS-1 dengan IC50 sebesar 4,16 mg/ml (24 jam), 4,22 mg/ml (48 jam), dan 2,78 mg/ml (72 jam). Kumarin 8-hidroksiisokapnolakton-2',3'-diol menimbulkan efek sitotoksik sel mieloma melalui mekanisme apoptosis, dengan EC50 apoptosisnya sebesar 8,94 mg/ml. Kumarin ini juga menyebabkan penurunan ekspresi Bcl-2 sel mieloma dengan IC50 penghambatan ekspresi Bcl-2 sebesar 17,88 mg/ml. Kesimpulan: Kumarin 8-hidroksiisokapnolakton-2',3'-diol mempunyai efek sitotoksik terhadap sel mieloma, dan efek ini ditimbulkan melalui mekanisme apoptosis, yaitu dengan menyebabkan penurunan ekspresi Bcl-2.

Background: Multiple myeloma shows resistance to chemotherapy after being treated for some time, and one of the causes is overexpression of Bcl-2. Several coumarins had been shown to have cytotoxic activity, and one of them, i.e. imperatorin, caused apoptosis on cancer cells by suppressing the expression of Bcl-2. Coumarin 8-hydroxyisocapnolactone-2',3'-diol, isolated from Micromelum minutum leaves, has showed cytotoxic activity on several cancer cell lines. This coumarin is presumed to have the same activity on myeloma cells. Objective: The aims of the study were to find out whether the coumarin 8- hydroxyisocapnolactone-2',3'-diol have cytotoxic activity on myeloma cell line and to find out whether the effect is caused through apoptotic process by suppressing the expression of Bcl-2. Method: Cytotoxicity assay of coumarin 8-hydroxyisocapnolactone-2',3'-diol was performed on myeloma cell line NS-1, using trypan blue exclusion assay, with incubation time of 24, 48, and 72 hours. Apoptotic assay was performed on myeloma cell line incubated with coumarin for 24 hours, by immunofluorescence method, using fluorochromes ethidium bromide and acridine orange. Expression of Bcl-2 was examined on myeloma cell line incubated with coumarin for 24 hours, by immunohistochemistry method. Doxorubicin was used as positive control in cytotoxic and apoptotic assay. Result: Coumarin 8-hydroxyisocapnolactone-2',3'-diol showed cytotoxic activity on myeloma cell line NS-1, with IC50 of 4.16 mg/ml (24 hours), 4.22 mg/ml (48 hours), and 2.78 mg/ml (72 hours). Coumarin 8-hydroxyisocapnolactone-2',3'-diol caused cytotoxicity through apoptotic process, and the apoptotic EC50 was 8.94 mg/ml. The coumarin also suppressed the expression of Bcl-2 with IC50 of 17.88 mg/ml. Conclusion: Coumarin 8-hydroxyisocapnolactone-2',3'-diol showed cytotoxic activity on myeloma cell line through apoptotic process by suppressing the expression of Bcl-2.

Kata Kunci : Kanker,Sel Mieloma,Kumarin 8 Hidroksiisokapnolakton,2'3',diol, Coumarin – 8-hydroxyisocapnolactone-2',3'-diol – M. minutum – cytotoxic – apoptosis – expression of Bcl-2 – myeloma cell line