Isolasi identifikasi dan standarisasi sinensetin sebagai parameter pada ekstrak daun Kumis Kucing (Orthosiphon stamineus, Benth.)

SOEMARDI, Edy, Dr. Suwidjiyo Pramono, DEA.,Apt

2004 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Daun kumis kucing (Orthosiphon stamineus, Benth.), telah diketahui baik secara empiris maupun dari hasil penelitian mempunyai manfaat farmakologi sebagai antihipertensi. Telah diklakukan penelitian yang bertujuan untuk mengisolasi, mengidentifikasi, dan melakukan standarisasi sinensetin sebagai parameter pada ekstrak daun kumis kucing. Optimasi metode ekstraksi dilakukan dengan metode simplex lattice design. Isolasi dilakukan dari ekstrak etil asetat daun kumis kucing dengan metode kromatografi kolom dengan fase diam silika gel dan fase gerak kloroform : etil asetat (6:4). Kemudian dilanjutkan dengan kromatografi lapis tipis (KLT) preparatif, dengan fase gerak dan fase diam yang sama. Untuk menguji kemurnian dilakukan dengan KLT tiga sistem fase gerak yang berbeda kepolarannya, metode titik lebur, dan metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT). Identifikasi atau elusidasi struktur untuk memastikan senyawa hasil isolasi adalah sinensetin dilakukan dengan spektrometri massa, spektrofotometri infra merah, dan spektrofotometri Ultraviolet visibel. Dari informasi yang diperoleh dari spektra Ultraviolet visibel menunjukkan puncak serapan merupakan senyawa flavonoid aglikon termetilasi, dibuktikan tidak adanya pergeseran dengan pereaksi geser. Dari spektra infra merah menunjukkan adanya gugus-gugus fungsi karbonil, gugus benzena, dan ikatan C-H siklik dan aromatis, sementara dari spektra massa terlihat puncak m/z ion molekul yang muncul adalah puncak dari ion molekul sinensetin dengan bobot molekul 360. Informasi berupa pergeseran kimia dari spektrometri 1H-NMR muncul pada d 3,66 ppm, d 3,79 ppm, dan d 3,68 ppm yang merupakan gugus metil pada cincin A dan B. Adanya cincin aromatis ditunjukkan pada d 6,17 s.d. 6,71 ppm. Informasi di atas meyakinkan bahwa isolat adalah sinensetin. Standarisasi dilakukan dengan metode KCKT dengan fase diam C18 dan fase gerak asetonitril : air (35:65) dan metode spektrofotometri Ultraviolet visibel. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa ada perbedaan kadar yang tertetapkan dengan metode spektrofotometri Ultraviolet visibel dan KCKT. Dari data ekstraksi dengan metode simplex lattice design dengan campuran pelarut metanol-air pada berbagai perbandingan diperoleh hasil bahwa sinensetin dengan kadar tertinggi diperoleh dari ekstrak dengan penyari metanol 100%.

Isolation and identification of sinensetin from leaves of Orthosiphon stamineus, Benth. and its use as parameter standarization were performed. Isolation was done from ethyl acetate extract of the leaves by column chromatography and followed by preparative thin layer chromatography to get relatively pure substance i.e. sinensetin which shown green light fluorescence under Uv light. The system of both of chromatography was normal phase, here silica gel as stationary phase and chloroform : ethyl acetate (6:4) as mobile phase. To examine the impurities of the isolate, we used three mobile phase of thin layer chromatography, system melting point test, and followed by High Performance Liquid Chromatography, here shown more than 90 percent of purities. Structural identification of the compound to clarify the sinensetin structure was held by spectroscopy method, here using infra red spectrophotometer, mass spectrometer, and Ultraviolet visible spectrophotometer. The result show that the functional group of infra red spectrogram was contain of carbonyl group, CH aromatic and cyclic, benzene, and methoxy group. The ultraviolet spectrum show the compound was an aglicon flavonoid being methylated, shown by it was not moveable by certain reactant in ultraviolet spectrophotometer. The mass spectrometer gave the information of its molecular ion peak as parent ion and its fragmentation as daughter ion show that the substance was rightly sinensetin. So do the spectra in 1H-NMR here, chemical shift was appear on d 3.66 ppm, d 3.79 ppm, and d 3.68 ppm showed methoxy group on the aglicone part. The protons from ring B appear on d 6.17 ppm until d 6.71 ppm. Standardization method by HPLC and spectrophotometer UV – Vis showed different result, that may caused by other similar chromophor group from other substances contain in Orthosipon leaves, here scullaterin and euphatorin. The highest percentage of sinensetin contain in methanol absolute extract compare by other combination of water and methanol as solvent of extraction by simplex lattice design method.

Kata Kunci : sinensetin, isolasi, identifikasi, standarisasi, Orthosiphon stamineus, Benth, Orthosiphon stamineus, Benth., sinensetin, isolation, identification, standardization