Pengaruh fraksi Kloroform Ekstrak Buah Brucea javanica (L.) Merr. (Buah Makassar) terhadap Sitotoksisitas, aktifitas proliferasi dan ekspresi Gen P53 pada Sel Raji terinfeksi Epstein Barr Virus (EBV) dan Sel HeLa terinfeksi Human Papilloma Virus (HPV)

ALI, Aisyah, Prof.dr. Sofia Mubarika, M.Med.Sc.,PhD

2004 | Tesis | S2 Ilmu Kedokteran Tropis

Brucea javanica (L.) Merr. (buah Makassar) merupakan tumbuhan yang tumbuh tersebar luas di seluruh Indonesia, oleh sebagian masyarakat digunakan sebagai obat dalam penyembuhan berbagai penyakit. Kandungannya terdiri dari beberapa senyawa aktif yang telah diidentifikasi bersifat sitotoksik terhadap berbagai jenis sel kanker. Penelitian ini bertujuan untuk mengkaji aktifitas sitotoksik fraksi chloroform buah B. javanica (L.) Merr terhadap sel HeLa (cell line yang berasal dari kanker serviks yang berasal dari sel epitel serviks yang terinfeksi HPV 18) dan sel Raji (Lymphoblastoid cell line dari sel lmfosit B yang terinfeksi EBV) terutama kaitan ekspresi p53 dengan apoptosis dan atau penghambatan waktu proliferasi sel tersebut. Aktivitas sitotoksik fraksi chloroform buah B. javanica (L.) Merr terhadap sel uji Raji dan HeLa diamati secara visual dengan metode penghitungan trypan blue dye exclusion. Aktifitas proliferasi diamati dengan cara membandingkan nilai slope grafik log jumlah sel pada waktu pengamatan 0, 24, 48 dan 72 jam. TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) assay digunakan untuk mengevaluasi dan mengetahui kuantitas sel yang mengalami apoptosis. Pengamatan ekspresi protein p53 dilakukan dengan menggunakan pengecatan Imunohistokimia (IHC). Fraksi chloroformbuah B. javanica (L.) Merr memiliki aktivitas sitotoksik dan menyebabkan penundaan waktu penggandaan sel. Pada sel Raji nilai LC50 diperoleh pada konsentrasi 0,52 μg/ml. Waktu penggandaan sel (doubling time) menunjukkan slope negatif pada konsentrasi 0,48 μg/ml, 99,3 jam pada konsentrasi 0,24 μg/ml, dan 38,124 jam pada konsentrasi 0,12 μg/ml. Pada sel HeLa nilai LC50 diperoleh pada konsentrasi 2,278 μg/ml. Waktu penggandaan sel (doubling time) menunjukkan slope negatif pada konsentrasi 1,975 μg/ml, 109,25 jam pada konsentrasi 0,98 μg/ml, dan 52,69 jam pada konsentrasi 0,12 μg/ml. Aktivasi dan stabilisasi protein p53 pada kedua sel uji terjadi pada waktu pengamatan 60,120 dan 180 menit. Fraksi kloroform buah B. javanica (L.) Merr memiliki aktivitas sitotoksik dan menyebabkan penghambatan aktivitas proliferasi sel Raji dan HeLa. Kematian sel yang terjadi adalah apoptosis yang terkait dengan aktivasi dan stabilisasi ekspresi protein p53.

Brucea javanica (L.) Merr. (buah Makassar) is a plant which can easily be found in Indonesia. This fruit has been used by people to treat many type of diseases. It contain several active compound wich are cytotoxic for many cancer cell type. The aim of this research is to review cyotoxic activity of chloroform fraction of B. javanica (L.) Merr. against HeLa and Raji cell lines. Proliferation activity of these cells and the expression of p53 genes in relation with apoptosis. The cytotoxic activity of chloroform fraction of B. javanica (L.) Merr. fruit tested on Raji and HeLa cell based on trypan blue dye exclusion measure method. The proliferative activity were analyzed by comparing the slope log of cell number on time 0, 24, 48, and 72 hours. TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-end Labeling) were assay applied to evaluate and detect cell quantity, and the expression of p53 determind protein using immunohistochemistry (IHC) staining. The chloroform fraction of B. javanica (L.)Merr. fruit extract has cytotoxic activity against Raji and HeLa cell lines and also shows to delay the cells doubling time. The LC50 against Raji cell was 0,52 μg/ml. The doubling time on Raji cell test shows negative slope at concentration of 0,48 μg/ml, 99,3 hours at concentration of 0,24 μg/ml, and 38,124 hours at concentration of 0,12 μg/ml. The LC50 against HeLa cell was 2,278 μg/ml. While on HeLa cell the doubling time shows negative slope at concentration of 1,975 μg/ml, 109,25 hours at concentration of 0,98 μg/ml and 52,69 hours at concentration of 0,48 μg/ml. The activation and stabilization of p53 protein expression occurs on the observation time 60,120 and 180 minutes. In conclution the chloroform fraction of B. javanica (L.)Merr. fruit extract has cytotoxic activity and inhibition of proliveration activity of Raji and HeLa cell lines. The decease cell occurs is a result of apoptosis that banded with activation and stabilization of p53 protein expression.

Kata Kunci : Kedokteran Tropis,Uji Sitoksisitas,Ekstrak Brucea Javanica L Merr,EBV dan HPV, Chloroform fraction activity B. javanica (L.) Merr. fruit, cytotoxicity, apoptosis, proliferation activity, protein p53 expression, Raji cell, HeLa cell