ISOLASI DAN KARAKTERISASI EQUINE GINGIVAL MESENCHYMAL STEM CELLS BERDASARKAN EKSPRESI GEN DENGAN REAL-TIME POLYMERASE CHAIN REACTION

Detavia Lesmana, drh. Medania Purwaningrum, M.Sc., Ph.D.

2025 | Skripsi | KEDOKTERAN HEWAN

Mesenchymal stem cells (MSCs) memiliki potensi besar dalam terapi regeneratif di bidang kedokteran hewan. Penelitian mengenai MSCs yang berasal dari jaringan gingiva kuda masih terbatas. Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi morfologi sel dari equine gingival mesenchymal stem cells (eGMSCs) dan menganalisis karakterisasi eGMSCs berdasarkan ekspresi gen menggunakan metode qPCR. Sel diisolasi menggunakan metode eksplantasi, kemudian dilakukan karakterisasi melalui uji Colony-Forming Unit (CFU), Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR), dan Real-time Polymerase Chain Reaction(qPCR). Hasil menunjukkan bahwa sel hasil isolasi memiliki morfologi bulat dan menempel pada permukaan kultur, sedangkan sel pada passage keempat berbentuk seperti fibroblast dan menempel dengan baik. Uji CFU menunjukkan pembentukan koloni, yang menandakan kemampuan proliferasi yang baik. Hasil analisis ekspresi gen menunjukkan ekspresi relatif NANOG sebesar 7568,7608 terhadap GAPDH, CD29 sebesar 0,2392, RUNX2 sebesar 3,9340, SOX9 sebesar 0,0001, dan PPARG sebesar 0,0027. Berdasarkan hasil tersebut, eGMSCs dapat dikategorikan sebagai stem cells karena kemampuan menempel dan proliferasinya yang baik. Ekspresi RUNX2 yang lebih tinggi daripada SOX9 dan PPARG mengindikasikan adanya potensi diferensiasi osteogenik, sehingga eGMSCs berpotensi digunakan dalam regenerasi tulang dan terapi osteogenik di bidang kedokteran hewan. Penelitian lanjutan disarankan dengan melakukan karakterisasi lebih lanjut melalui multilineage differentiation, wound healing assay, dan staining untuk memperoleh karakterisasi eGMSCs yang lebih spesifik.

Mesenchymal stem cells (MSCs) hold significant potential for regenerative therapies in veterinary medicine. Research on MSCs derived from equine gingival tissue remains limited. This study aimed to identify the cell morphology of equine gingival mesenchymal stem cells (eGMSCs) and to analyze their characterization based on gene expression using qPCR. Cells were isolated using the explant method and subsequently characterized through Colony-forming Unit (CFU) assay, Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR), and Real-time Polymerase Chain Reaction (qPCR). The isolated cells initially exhibited a round morphology and adhered to the culture dish, while cells at passage 4 displayed a fibroblast-like morphology with strong adherence. The CFU assay demonstrated colony formation, indicating a robust proliferative capacity. Gene expression analysis revealed relative expression levels of NANOG at 7568.7608, CD29 at 0.2392, RUNX2 at 3.9340, SOX9 at 0.0001, and PPARG at 0.0027, all normalized to GAPDH. These results suggest that eGMSCs qualify as stem cells due to their adherence and proliferative properties. The higher expression of RUNX2 compared to SOX9 and PPARG indicates a potential for osteogenic differentiation, suggesting that eGMSCs may be utilized in bone regeneration and osteogenic therapies in the field of veterinary medicine. Further studies are recommended to conduct more extensive characterization through multilineage differentiation, wound healing assays, and specific staining in order to obtain a more detailed profile of eGMSCs.

Kata Kunci : ekspresi gen, equine gingival mesenchymal stem cells, kuda, marker, mesenchymal stem cells, qPCR