Transformasi Gen KNAT1 (Knotted1 like Arabidopsis thaliana) pada Anggrek Bulan Phalaenopsis amabilis (L.) Bl

ISMININGSIH, Sulastri, Dr. Endang Semiarti, MS.,MSc

2004 | Tesis | S2 Bioteknologi

Untuk mengetahui fungsi gen KNAT1 Arabidopsis dalam pembentukan dan perkembangan tunas tanaman anggrek bulan asli Indonesia Phalaenopsis amabilis telah dilakukan transformasi p35S::KNAT1 dan pGreen pada protrocrom like bodies (plb) tanaman anggrek dengan mediator Agrobacterium tumafaciens LBA4404. Plb yang ditransformasi ditanam pada medium seleksi New Phalaenopsis dengan penambahan 5 mg/l BAP, 0.15 mg/l NAA, 15 mg/l Kanamycin dan 300 mg/l Cefotaxim untuk mengeliminasi overgrowth dari Agrobacterium. Analisis transforman positif dilakukan dengan metode PCR (Polimerase Chain Reaction) menggunakan primer oligonuckleutida spesifik untuk gen KNAT1: KNAT1F1R1 dan Universal primer untuk plasmid pGreen: 35SO dan Tnos. Hasil penelitian menunjukkan bahwa 3 tunas positif membawa konstruksi 35S::KNAT1 dari 1850 plb yang ditansformasi, sehingga effisiensi transformasi adalah 0,16 %. Sedangkan dari transformasi pGreen vector diperoleh 5 tunas anggrek transforman positif dari 1850 plb yang ditransformasi (effisiensi transformasi 0,27 %). Analisis fenotip menunjukkan terjadi multiplikasi pembentukan tunas dari 1 plb menjadi + 10 tunas dan terjadi juga pembentukan daun yang berbeda dari tanaman normalnya yaitu berbentuk seperti terompet atau belah ketupat.

To understand the function of KNAT1 gene Arabidopsis in the forming and developing of Indonesian origin orchid shoot Phalaenopsis amabilis through transform p35S::KNAT1 and pGreen to protocrom like bodies (plb) of the orchid mediated by Agrobacterium tumafaciens LBA4404. The plb transformants were grown on New Phalaenopsis selection medium containing 5 mg/l BAP, 0.15 mg/l NAA, 15 mg.l Kanamycin and addition of 300 mg/l Cefotaxim to eliminate the overgrowth of Agrobacterium. The analysis of positive transformant use Polimerase Chain Reaction (PCR) with the specific oligonucleotide primers for KNAT1 gene: KNAT1F1R1 and universal primers for pGreen: 35SO and Tnos. The result shows that 3 shoots of 1850 transformans positively carry out the 35S::KNAT1 construct (frequency of transformation was 0.16 %) while 5 shoot of 1850 transformans also positively carry out the pGreen vector, with the frequency of transformation was 0.27 %. The phenotype analysis of 35S::KNAT1 transformants show multiplication on forming of the leaf from a plb to + 10 shoots and forming of the leaf shape which has terompet like shapes and rectangular shape.

Kata Kunci : Bioteknologi,Tanaman Anggrek,Transformasi Gen KNAT1, Arabidopsis, KNAT1 gene, Phalaenopsis amabilis, shoot