Transformasi gen AS2 (Asymmetric Leaves2) Arabidopsis pada angrek bulan Phalaenopsis amabilis (L.) Bl

HANDAYANI, Etty, Dr. Endang Semiarti, MS.,MSc

2004 | Tesis | S2 Bioteknologi

Untuk mengetahui effisiensi transformasi gen AS2 Arabidopsis pada tanaman anggrek bulan Phalaenopsis amabilis, telah dilakukan penelitian transformasi plasmid p35S::AS2 dan pSK1 kedalam plb (proembrio) anggrek Ph. amabilis dengan mediator Agrobacterium tumefaciens LBA4404. Plb hasil transformasi ditanam pada media Knudson C + BAP 5 mg/l + NAA 0,15 mg/l dengan seleksi ketahanan terhadap antibiotik kanamisin 15 mg/l yang ditambah cefotaxim 300 mg/l untuk mengeliminasi overgrow A. tumefaciens. Keberhasilan tranformasi ditentukan dengan cara amplifikasi gen AS2 (menggunakan oligonukleotida primer spesifik gen AS2) maupun pSK1 (menggunakan oligonukleotida primer universal untuk sekuen promotor 35S0 dari plasmid pSK1) dari tunas yang tumbuh pada medium seleksi antibiotik dengan menggunakan teknik Polymerase Chain Reaction (PCR). Hasil penelitian menunjukkan bahwa dari 3025 plb yang ditransformasi dengan 35S::AS2 telah berhasil didapatkan 3 tunas transforman yang positif membawa konstruksi 35S::AS2 dengan effisiensi 0,099%, sedangkan effisiensi transformasi pSK1 sebesar 1% (3 tunas dari 300 plb yang ditransformasi dengan pSK1). Transformasi gen AS2 Arabidopsis pada Ph. amabilis menghasilkan fenotip daun yang berbeda dengan tanaman non-transforman yaitu bentuk ujung daun menjadi lebih membulat.

To understand the transformation efficiency of Arabidopsis AS2 (ASYMMETRIC LEAVES2) gene into Phalaenopsis amabilis orchids protocorm, the research has been done by using p35S::AS2 and pSK1 plasmid with Agrobacetrium tumefaciens strain LBA4404 as the mediator. The transformants were grown on KnudsonC medium containing 5 mg/l BAP, 0.15 mg/l NAA, 15 mg/l kanamycin and addition of 300 mg/l cefotaxim to eliminate the overgrowth of A. tumefaciens. Cointegration of the AS2 transgene into the orchid plant genome was decided by PCR method using specific oligonucleotide primers AS2 F₂R₂ for AS2 gene and universal primers 35S0 and T-Nos for 35S-pSK1. The results show that three out of 3025 plbs were positively carry out the 35S::AS2 construct (efficiency of transformation was 0.099%) and the efficiency of transforman with pSK1 was 1% (three out of 300 plbs). The phenotype of 35S::AS2 transgenic show alternation of the leaf shape which has a rounder leaf tip.

Kata Kunci : Bioteknologi Tanaman Anggrek,Transformasi Gen AS2,Orchid Plant Biotechnology, Gene Transformation