Isolasi, Purifikasi, dan Karakterisasi Laccase Ekstraseluler dari Jamur Aspergillus oryzae KKB4 yang Memiliki Potensi Mendegradasi Aflatoksin B1

Maria Nobelia Grecia, Dr.rer.nat. Lucia Dhiantika Witasari, S.Farm., Apt., M. Biotech.; Dr.nat.techn. Francis M Constance Sigit Setyabudi, S.T.P., M.P.

2025 | Skripsi | TEKNOLOGI PANGAN & HASIL PERTANIAN

Laccase merupakan salah satu enzim ekstraseluler yang mampu mendegradasi aflatoksin B1 (AFB1), salah satu mycotoxin paling toksik di rantai pangan, sehingga upaya detoksifikasinya penting. Aspergillus oryzae KKB4 diisolasi dari koji dan terbukti mampu mereduksi AFB1. Produksinya dapat ditingkatkan dengan penambahan inducer pada media tumbuh, salah satu yang berpotensi yaitu ABTS.

Penelitian ini bertujuan mengetahui adanya enzim laccase pada Aspergillus oryzae KKB4 serta mengevaluasi karakteristiknya. Dilakukan presipitasi amonium sulfat serta dialisis sebagai upaya pemurnian, dilanjutkan uji ABTS, uji Bradford, SDS PAGE, profil suhu, pH, uji kinetika enzim, kofaktor, serta inhibitor laccase pada Aspergillus oryzae KKB4.

Hasil menunjukkan aktivitas laccase tertinggi pada sampel fraksi 60-80% amonium sulfat (6.44 U/ml), dengan aktivitas spesifik (284.85 U/mg), serta kemurnian 1.47fold. Suhu dan pH optimum laccase pada 30? dan 4,5. Data kinetika laccase menunjukkan nilai Km sebesar 0,0194 mM dan Vmaks sebesar 7,4865 U/mg. Kofaktor copper sulfate dapat meningkatkan aktivitas laccase pada 0,1mM sebesar 64%, serta inhibitor laccase terbaik yaitu SDS pada konsentrasi 0,5mM. Hasil penelitian ini menunjukkan adanya potensi laccase pada A. oryzae KKB4 dalam mendegradasi AFB1.

Laccase is one of the extracelular enzymes that is capable of degrading aflatoxin B1 (AFB1), one of the most toxic mycotoxins in the food chain, therefore the detoxification of it is crucial. Aspergillus oryzae KKB4 was isolated from koji and has the capability to reduce AFB1 levels. The fungi production can be enhanced by adding inducers to the growth medium, the most potential one is ABTS.

This study aims to determine the presence of laccase enzyme in Aspergillus oryzae KKB4 and to characterize its properties. Ammonium sulfate precipitation and dialysis were performed for purification, followed by ABTS assay, Bradford assay, SDS-PAGE, temperature and pH profiling, enzyme kinetics assay, laccase cofactor and inhibitor assay.

The results showed the highest laccase activity present in the 60-80% ammonium sulfate fraction (6.44 U/ml), with a specific activity of (284.85 U/mg) and a purity of 1.47 fold. The optimum temperature and pH of laccase at 30? and 4.5. The kinetic data for laccase showed a Km value of 0.0194 mM and a Vmax of 7.4865 U/mg. The cofactor copper sulfate can enhance laccase activity by 64% at 0.1 mM, and the best laccase inhibitor is SDS at a concentration of 0.5 mM. These research’s results indicate the potential of laccase from A. oryzae KKB4 in degrading AFB1.

Kata Kunci : Aspergillus oryzae KKB4, aktivitas enzim, berat molekul, inhibitor, karakteristik enzim, kofaktor, laccase