Validasi metode LC-MS/MS untuk determinasi obat antituberkulosis fixed dose combination (FDC) dan aplikasinya pada studi farmakokinetik akibat pemberian ekstrak ikan gabus (Channa striata)

Andi Suhendi, Prof. Dr.apt. Abdul Rohman, M.Si; Prof. Dr. apt. Arief Nurrochmad, M.Si., M.Sc; Prof. Dr. apt. Djoko Wahyono, S.U

2024 | Disertasi | S3 Ilmu Farmasi

 Tuberkulosis (TB) merupakan salah satu penyakit infeksi di berbagai negara. Standar terapi TB menggunakan sediaan fixed dose combination (FDC), yang terdiri dari rifampisin (RIF), pirazinamid (PZA), isoniazid (INH) dan etambutol (EMB). Obat-obat tersebut berpotensi menyebabkan hepatotoksisitas, kejadian di BBKPM Makassar sebesar 23,5%. Suplementasi ekstrak ikan gabus (EIG) pada pasien TB menunjukkan kenaikan indeks massa tubuh, kenaikan albumin dan percepatan status BTA negatif. Penggunaan FDC dan EIG secara bersamaan berpotensi mempengaruhi farmakokinetik obatnya. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk memvalidasi metode analisis LC-MS/MS untuk determinasi obat antituberkulosis lini pertama FDC dan aplikasinya pada studi farmakokinetik obat antituberkulosis FDC akibat pemberian EIG. Efek samping obat antituberkulosis dan pengaruhnya pemberian EIG dievaluasi berdasarkan perubahan SGPT, SGOT, ALP dan albumin serta histopatologi hepar.

Studi farmakokinetik dilakukan menggunakan tikus yang mendapatkan obat antituberkulosis FDC yang dikelompokkan menjadi kelompok kontrol dan perlakuan suplemen EIG dosis 54 mg/200 gBB. Sampling darah dilakukan pada waktu-waktu tertentu dan disimpan dalam bentuk serum. Evaluasi efek samping obat dilakukan pada tikus yang mendapatkan obat antituberkulosis dan EIG. Perubahan kimia darah dilakukan dengan reagen kit yang sesuai dan dibaca dengan spektrofotometer Vis serta histopatologi hepar dilakukan oleh dokter spesialis patologi. Preparasi sampel untuk penetapan kadar dengan metode ekstraksi cair-cair menggunakan metanol. Validasi metode analisis dilakukan dengan menggunakan LC-MS/MS dan fase gerak yaitu campuran metanol dan air secara gradient dengan kecepatan 0,4 mL/menit.

Hasil linieritas untuk INH, PZA dan RIF yaitu 0,02-25 µg/mL dan 0,02-6,00 µg/mL (EMB). Rentang %recovery EMB (91,0-111,2%), INH (95,5-116,9%), PZA (98,2-112,9%) dan RIF (81,2-113,4%). Presisi intra-day menunjukkan nilai RSD berturut-turut yaitu 0,7-8,3%; 3,5-9,4%; 4,0-8,6?n 2,0-7,7?n inter-day yaitu 2,0-5,9%; 3,8-7,3%; 5,0-7,6?n 5,1-8,4%. Batas bawah kuantifikasi semua obat yaitu 0,02 µg/mL. Suplementasi EIG menurunkan kadar SGPT, SGOT, ALP dan kenaikan kadar albumin dibandingkan kelompok yang mendapatkan obat antituberkulosis FDC. Pemberian tunggal EIG tidak mempengaruhi profil farmakokinetik EMB (p>0,05), namun naik signifikan (p<0>maks INH, volume distribusi (Vd), klirens (Cl) dan AUC PZA dan Cmaks RIF dan PZA. Pemberian berulang EIG tidak mempengaruhi parameter farmakokinetik EMB dan RIF (p>0,05), namun mempengaruhi Vd, tmaks dan AUC0-? INH (p<0>maks PZA (p<0>0,05), pemberian EIG berulang menyebabkan bioavailabilitas INH naik (p<0>0,05). 

Tuberculosis (TB) is an infectious disease in any countries. Standard TB therapy uses fixed dose combination (FDC) regimen, which consist of rifampicin (RIF), pyrazinamide (PZA), isoniazid (INH) and ethambutol (EMB). These drugs have the potential to cause hepatotoxicity, the incidence at BBKPM Makassar was 23.5%. Supplementation of snakehead fish extract (EIG) in TB patients shows an increase in body mass index, an increase in albumin and an acceleration of BTA negative status. Concomitant use of FDC and EIG has the potential to affect the pharmacokinetics of the drug. Therefore, this study aims to validate the LC-MS/MS analysis method for the determination of first-line antituberculosis drug FDC and its application in pharmacokinetic studies of antituberculosis drug FDC due to administration of EIG. The side effects of antituberculosis drugs and the effect of EIG administration were evaluated based on changes in SGPT, SGOT, ALP and albumin as well as liver histopathology.

Pharmacokinetic studies were carried out using mice that received the anti-tuberculosis drug FDC which were grouped into control groups and those treated with EIG supplements at a dose of 54 mg/200 g.BW. Blood sampling is carried out at certain times and stored in the form of serum. Evaluation of drug side effects was carried out on mice that received antituberculosis drugs and EIG. Changes in blood chemistry are carried out with appropriate reagent kits and read with a Vis spectrophotometer and liver histopathology is carried out by a specialist pathologist. Sample preparation for assay using the liquid-liquid extraction method using methanol. Validation of the analytical method was carried out using LC-MS/MS and the mobile phase was a mixture of methanol and water in a gradient at a speed of 0.4 mL/minute.

The linearity of INH, PZA and RIF are 0.02-25 µg/mL and 0.02-6.00 µg/mL (EMB). Range %recovery of EMB (91.0-111.2%), INH (95.5-116.9%), PZA (98.2-112.9%) and RIF (81.2-113.4%). Intra-day precision shows consecutive RSD values ??of 0.7-8.3%; 3.5-9.4%; 4.0-8.6% and 2.0-7.7% and inter-day namely 2.0-5.9%; 3.8-7.3%; 5.0-7.6% and 5.1-8.4%. The lower limit of quantification for all drugs is 0.02 µg/mL. EIG supplementation reduced SGPT, SGOT, ALP levels and increased albumin levels compared to the group receiving the antituberculosis drug FDC. A single administration of EIG did not affect the pharmacokinetic profile of EMB (p>0.05), but increased significantly (p<0>max, volume of distribution (Vd), clearance (Cl) and AUC of PZA and C_max of RIF and PZA. Repeated dose of EIG did not affect the pharmacokinetic parameters of EMB and RIF (p>0.05), but affected Vd, t_max and AUC_0-? INH (p<0>max of PZA (p<0>0.05), repeated dose of EIG caused the bioavailability of INH to increase (p<0>0.05).

Kata Kunci : obat anti tuberkulosis, LC-MS/MS, validasi metode, ekstrak ikan gabus, profil farmakokinetik, efek samping obat