Transformasi Plasmid Rekombinan Pembawa Gen PhaA Pada Escherichia coli BL21

AZIZAH TYAS NUGRAHANTY, Ganies Riza Aristya, S.Si., M.Sc., Ph.D.

2024 | Skripsi | BIOLOGI

Polyhydroxybutyrate (PHB) merupakan biopolimer yang ramah lingkungan dan dapat disintesis dari bakteri. Salah satu gen yang berperan penting dalam sintesis PHB pada bakteri adalah PhaA. Gen PhaA akan mengkode acetoacetyl-CoA pada Escherichia coli sebagai substrat utama biosintesis PHB. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan transformasi gen PhaA pengkode acetoacetyl-CoA pada Escherichia coli BL21, serta melakukan evaluasi hasil transformasi melalui pendekatan PCR, Sanger sequencing, dan pemotongan dengan enzim restriksi. Insersi plasmid rekombinan yang membawa gen PhaA pada sel E. coli BL21 dilakukan dengan metode elektroporasi dan diseleksi dengan menumbuhkan bakteri pada medium LB yang mengandung ampisilin. Berdasarkan hasil PCR koloni dan Sanger sequencing, diperoleh bahwa gen PhaA telah berhasil ditransformasikan pada E. coli BL21 yang ditunjukkan dengan kesesuaian terhadap gen target PhaA (KP681582.1). Hal ini didukung dengan data digest test menggunakan enzim restriksi NcoI dan SbfI yang menunjukkan adanya pita gen PhaA pada 1195 bp.

Polyhydroxybutyrate (PHB) is an environmentally friendly biopolymer and can be synthesized from bacteria. One of the genes that plays an important role in PHB synthesis in bacteria is PhaA. The PhaA gene is encoding acetoacetyl-CoA in Escherichia coli as the main substrate for PHB biosynthesis. This research aims to carry out transformation of the PhaA gene encoding acetoacetyl-CoA in Escherichia coli BL21, as well as evaluating the transformation results using PCR approaches, Sanger sequencing, and digest with restriction enzymes. Insertion of the recombinant plasmid carrying the PhaA gene into E. coli BL21 cells was carried out using the electroporation method and selected in LB medium containing ampicillin. Based on the results of colony PCR and Sanger sequencing, it was found that the PhaA gene had been successfully transformed in E. coli BL21 as indicated by suitability for the PhaA target gene (KP681582.1). This is supported by digest test data using the restriction enzymes NcoI and SbfI which shows the presence of the PhaA gene band at 1195 bp. 

Kata Kunci : E. coli BL21, gen PhaA, plasmid rekombinan, polyhydroxybutyrate, transformasi genetik