Laporkan Masalah

Isolasi dan karakterisasi kitinase akar tusam (Pinus merkusii Jungh. et de Vriese) yang bersimbiosis dengan jamur mikoriza-ekto

HANDAYANI, Alfina, Prof.Dr.Ir. S.M. Widyastuti, MSc

2004 | Tesis | S2 Bioteknologi

Tusam termasuk tanaman cepat tumbuh, mudah beradaptasi dan banyak dimanfaatkan dalam bidang industri. Asosiasi mikoriza mampu melindungi semai tusam dari serangan patogen akar. Mekanisme perlindungan tanaman oleh jamur mikoriza terhadap penyakit salah satunya berkaitan dengan produksi senyawa antifungal yaitu kitinase. Akumulasi kitinase pada tusam sebagai respon adanya infeksi jamur mikoriza belum jelas. Penelitian ini bertujuan untuk 1) mengetahui aktivitas kitinase pada semai bermikoriza 2) karakterisasi kitinase meliputi berat molekul, pH optimum, suhu optimum, serta aktivitas antifungal kitinase terhadap Fusarium sp. dan R. solani. Tahapan penelitian yang dilakukan meliputi, inokulasi mikoriza pada akar tusam, deteksi aktivitas dan isoform kitinase dengan menggunakan substrat glikol kitin, langkah pemisahan protein diawali dengan pengendapan ammonium sulfat, dialisis, pemekatan sampel dengan PEG dilanjutkan kromatografi gel filtrasi, berat molekul kitinase dideteksi menggunakan SDS PAGE, pengujian aktivitas antifungal kitinase dengan metode cup plate dan paper disk yang sudah dimodifikasi. Hasil penelitian menunjukkan akar semai tusam bermikoriza mempunyai aktivitas kitinase lebih tinggi daripada semai yang tidak bermikoriza. Aktivitas kitinase tertinggi pada semai tusam umur 4 minggu. Pemisahan protein diperoleh fraksi dengan aktivitas kitinase tertinggi mempunyai berat molekul 52 kDa, pH optimum 5 dan suhu optimum 30oC, uji aktivitas antifungal kitinase menunjukkan kitinase mampu menghambat miselia jamur Fusarium sp.

Tusam is a fast growing plant, adaptable and usefull in industry. Mycorrhizal assosiation protected tusam from root patogen. Disease protection by mycorrhizal fungi has been assosiated with several mechanism, one of which, antifungal substances chitinase. Hovewer, chitinase acumulation of tusam during mycorrhizal symbiosis is not fully described. The experiment was aimed: 1) to detect activity chitinase in root mycorrhizal seedling, 2) to characterize of chitinase i.e. molecular weight, optimum pH, optimum temperature and determine antifungal activity Fusarium sp. and R. solani. The stages of the research, there were: inoculated mycorrhizal in tusam seedling roots, chitinase activity and isoform detected using glycol chitin as a subtrat, the enzyme was purified by ammonium sulfat precipitation, dyalisis, followed by gel filtration chromatography on Sephacril S-300 HR and molecular weight of chitinase was determined on SDS PAGE, antifungal bioassay was done using modified cup plate method and paper disk. The results showed that the chitinase activity in mycorrhizal roots was higher than non mycorrhizal roots. The highest chitinase activity detected at 4 weeks age of tusam. Tusam produced chitinase with a molecular weight of approximately 52 kDa. The activity was optimum at pH 5 and temperature of 30oC, antifungal activity assay showed that chitinase inhibited the growth of myselium Fusarium sp.

Kata Kunci : Bioteknologi,Kitinase Tusam, isolation, characterization, chitinase, ectomycorrhizal, tusam, antifungal


    Tidak tersedia file untuk ditampilkan ke publik.