Kloning dan ekspresi cDNA penyandi protein solubel 28 kDa (GRA 2) Takizoit Toxoplasma gondii isolat lokal

SUBANDONO, Jarot, Dr.drh. Wayan T. Artama

2004 | Tesis | S2 Ilmu Kedokteran Tropis

Toxoplasma gondii merupakan parasit intraseluler penyebab toksoplasmosis yang banyak ditemukan di negara tropis. Penyakit ini berbahaya bila diderita oleh wanita hamil dan penderita yang mengalami imunodefisiensi. Toxoplasma gondii memiliki protein solubel 28 kDa dari granula padat (GRA2) yang paling imunogenik dibandingkan protein GRA lainnya. Hilangnya lokus gen yang menyandi protein GRA2 ini akan menurunkan virulensi T. gondii pada mencit sehingga dapat mencegah infeksi akut T. gondii pada mencit. Antibodi anti GRA2 dapat mencegah invasi T. gondii ke dalam sel makrofag, oleh karena itu perlu memproduksi protein 28 kDa (GRA2) ini. Tujuan penelitian ini adalah untuk memproduksi protein solubel 28 kDa (GRA2) takizoit T. gondii isolat lokal dengan melakukan kloning dan ekspresi cDNA penyandi protein tersebut. Ribonucleic acid (RNA) total diisolasi dari takizoit yang diperbanyak secara in vivo pada mencit strain Balb/c. Messenger RNA diisolasi dari RNA total dengan menggunakan polyATtract mRNA isolation systems dan sintesis cDNA menggunakan Universal RiboClone cDNA Synthesis Systems. Plasmid UC18 yang telah diligasi dengan cDNA ditransformasikan ke Escherichia coli XL1-Blue dengan teknik heat shock. Koloni rekombinan yang didapatkan ditumbuhkan dalam LB medium untuk isolasi pUC18 rekombinan dan ekspresi protein rekombinan. Protein rekombinan yang terekspresi dianalisis dengan imunobloting menggunakan antibodi poliklonal terhadap protein solubel T. gondii isolat lokal. Transformasi pUC18 pada E. coli XL1-Blue didapatkan dua koloni yang membawa cDNA penyandi protein rekombinan takizoit T. gondii isolat lokal dan dengan imunobloting menggunakan antibodi poliklonal terhadap protein solubel takizoit T. gondii isolat lokal didapatkan protein solubel dengan berat molekul 28 kDa yang diindikasikan sebagai protein GRA2 (PJG2-1 dan PJG2-2).

Toxoplasma gondii is an intracellular parasite that causes toxoplasmosis and found in tropical countries. Toxoplasmosis is dangerous if suffered by pregnant woman and immunodeficiency patients. Toxoplasma gondii has 28 kDa soluble protein from dense granule (GRA2) and among GRA proteins, GRA2 is probably the most immunogenic. Disruption of the GRA2 locus in T. gondii has resulted in decreasing of the parasite virulence in mice. Invasion of tachyzoites T. gondii into macrophages was also significantly inhibited by anti GRA2 antibody, therefore the availability of GRA2 protein is essential for development of protective vaccine. The aim of this research was to produce 28 kDa soluble protein (GRA2) by cloning and expression of cDNA encoding soluble protein tachyzoite of T. gondii local isolate. Total ribonucleic acid (RNA) and messenger RNA was isolated from tachyzoites of T. gondii grown up in Balb/c mice. Messenger RNA was isolated from total RNA using polyATtract mRNA Isolation Systems and synthesis of cDNA using Universal RiboClone cDNA Synthesis Systems. Recombinants of pUC18 were transformed into Escherichia coli XL1-Blue by heat shock technique. Expression of recombinant protein was analysed by immunoblotting using polyclonal antibodies against soluble protein of T. gondii. Two recombinant clones were isolated. The immunoblotting result indicate that the recombinant expressed 28 kDa recombinant protein which hibridized with the antibody polyclonal against soluble protein of T. gondii and the proteins are possibly GRA2 proteins (PJG2-1 and PJG2-2).

Kata Kunci : Toxoplasma Gondii,Antibodi GRA 2, Toxoplasma gondii, tachyzoite, cDNA, 28 kDa soluble protein.