Uji aktivitas ekstrak aseton bekicot sebagai penghambat infeksi virus dengue secara invitro

PURWANTININGSIH, Dr. Djoko Wahyuono, SU.,Apt

2003 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Demam berdarah dengue (DBD) telah lama berjangkit di Indonesia dan seringkali mengakibatkan kematian. DBD tidak hanya berjangkit di Indonesia tetapi telah tersebar luas di berbagai negara di dunia. Upaya untuk membatasi penyebaran DBD dan mengurangi angka kematian karena DBD yang dapat dilakukan hingga saat ini adalah dengan memberantas nyamuk penularnya karena vaksin untuk mencegah DBD dan obat untuk membasmi virusnya belum tersedia. Penelitian ini bertujuan untuk mencari/mengembangkan obat untuk pengobatan DBD tersebut. Penelitian ini dilakukan dalam 2 tahap yaitu ekstraksi untuk memperoleh ekstrak aseton bekicot beserta uji KLT-nya dan studi inhibisi infeksi Virus Dengue-3. Studi inhibisi dilakukan dengan cara sebagai berikut: disiapkan kultur sel vero atau sel c6/36 pada plate 96 sumuran dengan kepadatan 5.000-10.000 sel/sumuran. Dibuat suatu seri pengenceran 10 – 3,2. 10-3 mg/ml ekstrak aseton bekicot yang telah difilter steril dan heparin sebagai pembanding dengan media kemudian diinkubasi dengan virus Dengue-3 (pengenceran 1: 5 dari stok) selama 5 menit, 4 °C. Selanjutnya dilakukan infeksi pada sel, sel diinkubasi dan diamati. Adanya infeksi ditandai oleh pembentukan giant sel dan lisis sel. Infeksi oleh virus akan mengakibatkan sel mati dan lisis. Untuk mengetahui konsentrasi sel yang masih hidup, pada hari ke-10 dilakukan pemeriksaan dengan metoda MTT (MTT-Assay) atau konsentrasi virus dengan metode ELISA. Analisis data dilakukan dengan menghitung harga ID-50 (Inhibition Dose-50) dengan Analisa Probit dan diuji-t untuk membandingkan antara kedua kelompok perlakuan. Namun karena dalam percobaan ini harga ID-50 tidak dapat dihitung maka harga ID-50 kedua perlakuan tidak dapat dibandingkan. Dari penelitian yang telah dilakukan, dapat ditarik kesimpulan bahwa dari hasil uji KLT dan dilakukan deteksi dengan UV-366 dan pewarnaan dengan pereaksi ninhidrin, ekstrak aseton bekicot menunjukkan bercak dengan harga Rf dan warna yang sama dengan pembanding heparin. Sehingga diduga kuat ekstrak aseton bekicot mengandung senyawa heparan sulfat. Namun ekstrak aseton bekicot hasil ekstraksi tidak memiliki aktivitas penghambatan terhadap infeksi Virus Dengue-3. Tidak adanya aktivitas penghambatan tersebut kemungkinan disebabkan oleh: (1) senyawa yang diduga heparan sulfat yang terdapat dalam ekstrak bekicot konsentrasinya relatif kecil atau (2) senyawa tersebut heparan sulfat tetapi bukan yang tersulfatasi tinggi.

Dengue hemorrhagic fever (DHF) is an epidemic disease in Indonesia caused by dengue viruses, and it frequently causes death. DHF spreads not only in Indonesia but also throughout many countries in the world. At present, the efforts to restrict DHF spread and to decrease the mortality due to DHF have been by eradicating the mosquito borne, because the vaccine to prevent the DHF and the drug to exterminate the virus has not been available. The aim of this research is to seek and to develop a drug for DHF. The present investigation was done in two stages, i.e. extraction of the Mollusc by acetone and thin layer chromatographic (TLC) analysis, and an inhibition study. The C6/36 or Vero cells were prepared in 96-well plates (5,000 – 10,000 cells per well) for the inhibition study. Fivefold serial dilution, from 10 – 3.2, 10-3 mg/ml, of the acetone extract that had been filtered or heparin as a reference compound was incubated with Dengue-3 viruses (diluted 1:5 from a stock) for 5 min, 4 °C, and then was added to C6/36 or Vero cells. The cells were incubated and observed for cytopathic effect daily for 10 days. Dengue virus infection was confirmed as the cause of cytopathic effect in selected wells by ELISA analysis using a Dengue type-3 specific monoclonal antibody or MTT assay. Data was analyzed to calculate the ID-50 by Probit analyses, and t-test to compare the means between the two groups. Unfortunately the ID-50 could not be calculated in this experiment, although from the TLC and UV-366 analyses, and ninhydrin color reaction, it indicated the presence of heparan sulfate in the acetone extract of the Mollusc. In conclusion, the acetone extract of the Mollusc which had been expected to contain heparan sulfate, it did not show any inhibition activity towards Dengue-3 viral infection. The unexpected results might be due to a very low concentration of the active compound available in the extract, or the heparan might not be highly sulfated.

Kata Kunci : Obat DBD,Penghambat Enfeksi,Ekstrak Aseton Bekicot