Potensi Ekstrak Daun dan Ranting Castanopsis argentea (Blume) A. DC. dalam Menginduksi Apoptosis Sel Kanker Servik HeLa
Irkhamna Noviyani Khusna Millaty, Dr. Tri Rini Nuringtyas, M.Sc. ; Dr.biol.hom. Nastiti Wijayanti, S. Si., M.Si
2023 | Tesis | S2 Bioteknologi
Castanopsis argentea (Blume) A.DC atau Saninten merupakan salah satu jenis tumbuhan anggota suku Fagaceae. Perubahan lingkungan dan aktivitas manusia menurunkan populasi Castanopsis sehingga terancam punah. Untuk mendukung upaya konservasinya, studi bioprospeksi ini dilakukan untuk melihat potensi C. argentea sebagai agen antikanker. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi fraksi potensial C. argentea dalam menginduksi gen p53, Bax dan Casp3 pada sel kanker servik HeLa. Ekstrak daun dan ranting C. argentea dimaserasi dengan pelarut etil asetat, etanol 70?n aquades dan dikeringkan dengan rotary evaporator. Keenam ekstrak dievaluasi aktivitas sitotoksisitasnya dengan MTT assay dan ekstrak etil asetat ranting memiliki aktivitas terbaik dengan nilai IC50 37,76 ?g/mL. Ekstrak terpilih difraksinasi dengan Vacuum Liquid Chromatography (VLC) menggunakan campuran pelarut kloroform, etil asetat dan etanol dengan berbagai ratio dari non polar menuju polar dan dihasilkan 6 fraksi. Hasil uji sitotoksisitas fraksi C. argentea menunjukkan fraksi 2 dengan pelarut kloroform:etil asetat (75:25) merupakan fraksi potensial dengan nilai IC50 44,74 ?g/mL. Fraksi tidak bersifat toksik pada sel Vero dengan nilai selectivity index 7,11. Hasil uji kematian sel secara flowcytometry menunjukkan bahwa IC50 fraksi terpilih dapat menginduksi kematian sel melalui apoptosis sebesar 33%, sel nekrosis 16,8?n sel hidup 50,8%. Hasil analisis ekspresi gen menunjukkan bahwa pemberian fraksi terpilih selama 18 jam mampu meningkatkan ekspresi p53, Bax dan Casp3 dengan nilai fold change berturut-turut adalah 10,28 ± 2,73; 46,71 ± 2,06 dan 9,79 ± 2,14. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa fraksi 2 memiliki aktivitas antikanker pada sel kanker servik HeLa, sehingga dapat dijadikan sebagai kandidat agen kemoprevensi dalam pengobatan kanker.
Castanopsis argentea (Blume) A.DC or Saninten is one of the plant species of the Fagaceae tribe. Environmental changes and human activities have reduced the population of Castanopsis, making it threatened with extinction. To support its conservation efforts, this bioprospection study was conducted to see the potential of C. argentea as an anticancer agent. This study aims to evaluate the potential fractions of C. argentea in inducing p53, Bax and Casp3 genes in HeLa cervical cancer cells. C. argentea leaf and branch extracts were macerated with ethyl acetate, 70% ethanol and aquadest solvents and dried with a rotary evaporator. The six extracts were evaluated for cytotoxicity activity by MTT assay and the ethyl acetate extract of the branch had the best activity IC50 value of 37,76 ?g/mL. The selected extracts were fractionated by Vacuum Liquid Chromatography (VLC) using a mixture of chloroform, ethyl acetate and ethanol solvents with various ratios from non-polar to polar and produced 6 fractions. The results of the cytotoxicity test of C. argentea fractions showed that fraction 2 with chloroform:ethyl acetate solvent (75:25) was a potential fraction with an IC50 value of 44,74 ?g/mL. The fraction is not toxic to vero cells with a selectivity index value of 7,11. The results of cell death test by flow cytometry showed that the IC50 of the selected fraction can induce cell death through apoptosis by 33%, necrosis cells 16.8% and live cells 50.8%. The results of gene expression analysis showed that the tretment of selected fractions for 18 hours was able to increase the expression of p53, Bax and Casp3 with fold change values of 10,28 ± 2,73; 46,71 ± 2,06 and 9,79 ± 2,14 respectively. The results of this study indicate that fraction 2 has anticancer activity on HeLa cervical cancer cells, and therefore can be used as a candidate chemoprevention agent in cancer treatment.
Kata Kunci : Kanker servik, Castanopsis argentea, apoptosis, HeLa, antikanker
