Peningkatan Efisiensi Transfer Gen pada Vanda tricolor Lindley Var. Suavis dengan Menggunakan Metode Agroinfiltrasi

AINUN NIKIEN L, Prof. Dr. Endang Semiarti, M.S., M.Sc; Dr. Yekti Asih Purwestri, S.Si., M.Si

2023 | Tesis | MAGISTER BIOTEKNOLOGI

Vanda tricolor Lindley var. suavis di habitat aslinya dilaporkan merupakan anggrek yang langka akibat kerusakan hutan, erupsi Merapi dan karena perilaku manusia. Permintaan anggrek V. tricolor yang besar dimasyarakat dengan berbagai kebutuhan, sehingga membutuhkan metode yang mudah, andal dan efesien. Metode yang dapat digunakan adalah transformasi genetik dengan menggunakan A. tumefaciens untuk menghasilkan transforman anggrek V. tricolor. Transformasi genetik membutuhkan alternatif metode untuk mempercepat tahap transformasi genetik dan meningkatkan efisiensi transformasi. Tujuan penelitian ini adalah mengetahui efisiensi metode agroinfiltrasi dan mendapatkan metode agroinfiltrasi yang tepat pada V. tricolor. Penelitian ini akan melakukan variasi letak posisi injeksi, efektifitas salep, Strain A. tumefaciens, volume injeksi, dan variasi optical density. Hasil penelitian menunjukan bahwa transformasi genetik metode agroinfiltrasi yang terbaik dan memiliki efisiensi transformasi sebesar 100% pada anggrek V. tricolor dengan perlakuan suspensi A. tumefaciens GV3101 p2K1::GFP menggunakan buffer infiltrasi tanpa asetosiringon, OD600 1 dengan volume injeksi 500 mikroliter. Sedangkan hasil efisiensi transformasi 100 % dengan suspensi A. tumefaciens EHA105 pTA7002-AtRKD4 menggunakan buffer infiltrasi tanpa asetosiringon dan menggunakan asetosiringon 200 mikromolar, OD600 1 dengan volume injeksi 500 mikroliter Agroinfiltrasi merupakan metode transformasi genetik yang memiliki efisiensi yang tinggi pada anggrek V. tricolor. Penggunaan salep BAP dan TDZ memberikan pengaruh terhadap penyembuhan bekas luka injeksi pada tanaman V. tricolor

Vanda tricolor Lindley var. Suavis in its natural habitat is reported to be a rare orchid due to forest destruction, the Merapi eruption, and human behavior. The large demand for V. tricolor orchids in the community with various needs requires an easy, reliable, and efficient method. The method that can be used is genetic transformation using A. tumefaciens to produce V. tricolor orchid transformants. Genetic transformation requires alternative methods to accelerate the stage of genetic transformation and increase the efficiency of transformation. The purpose of this study is to determine the efficiency of agroinfiltration and get the right agroinfiltration method in V. tricolor. This research will vary the position of injection, ointment effectiveness, A. tumefaciens strain, injection volume, and optical density variations. The results showed that the genetic transformation of the agroinfiltration method is the best and has a transformation efficiency of 100% in V. tricolor orchids with the treatment of A. tumefaciens GV3101 p2K1::GFP suspension using infiltration buffer without acetosiringonE, OD600 1, with an injection volume of 500 microliter. While the results of 100% transformation efficiency with the suspension of A. tumefaciens EHA105 pTA7002-AtRKD4 using infiltration buffer without acetosyringone and using 200 micromolar acetosyringone, OD600 1 with an injection volume of 500 microliter Agroinfiltration is a genetic transformation method that has high efficiency in V. tricolor orchids. The use of BAP and TDZ ointments affects the healing of injection scars on V. tricolor plants.

Kata Kunci : Agroinfiltrasi, Efisiensi, Transformasi genetik, Salep