Identifikasi Peptida Antibakteri Hasil Fraksinasi Hidrolisat Tripsin Protein Ekstrak Aseton Biji Jarak Kepyar (Ricinus Communis L.)

ALIFIA FIRDAUS, Tri Joko Raharjo, S. Si., M. Si., Ph. D.; Respati Tri Swasono, S. Si., M. Phill., Ph. D.

2022 | Skripsi | S1 KIMIA

Dalam penelitian ini telah dilakukan identifikasi peptida hasil ekstraksi biji jarak kepyar (Ricinus communis L.) dengan tujuan mendapatkan urutan asam amino peptida dengan aktivitas antibakteri yang berpotensi dikembangkan sebagai kandidat antibiotik baru. Proses pengisolasian protein dari biji jarak kepyar dilakukan dengan penghilangan lemak menggunakan petroleum eter kemudian dilakukan isolasi protein dengan presipitasi menggunakan aseton. Protein kemudian dihidrolisis menggunakan enzim tripsin, hidrolisat yang dihasilkan difraksinasi menggunakan kolom penukar kation dengan variasi pH buffer pengelusi. Hasil fraksinasi kemudian diuji aktivitasnya sebagai antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus dengan metode difusi cakram. Fraksi dengan nilai aktivitas antibakteri paling tinggi diidentifikasi peptidanya menggunakan High Resolution Mass Spectroscopy (HRMS). Ekstraksi protein dari biji jarak kepyar dengan presipitasi aseton berhasil dilakukan terhadap serbuk jarak kepyar dan dihasilkan rendemen sebesar 66,88%. Hidrolisis protein menggunakan tripsin menghasilkan derajat hidrolisis sebesar 75,16%. Uji aktivitas antibakteri menunjukkan fraksi pH 6 dan 7 memiliki zona hambat paling besar yaitu masing-masing 16,00 mm dan 12,00 mm terhadap bakteri E. coli. Zona hambatan terhadap S. aureus masing-masing 17,00 mm dan 14,50 mm. Analisis menggunakan High Resolution Mass Spectroscopy (HRMS) terhadap fraksi pH 6 mengidentifikasi 2 peptida dengan urutan asam amino TFVTEGMR dan MATATGSSSK sedangkan pada fraksi pH 7 diidentifikasi 4 peptida yaitu dengan urutan asam amino SVTLLDTGSRPALPLWVLEMPIVR, MDRGWKPNVEISPNCPR, GTEEALVNRAGDLFNFMR, dan RLGASFGANLR.

In this study, identification of peptides extracted from castor bean (Ricinus communis L.) was carried out with the aim of obtaining amino acid sequences of peptides with antibacterial activity that have the potential to be developed as new antibiotic candidates. The process of protein isolation from castor bean (Ricinus communis L.) was carried out by deffating using petroleum ether and then the protein isolated by precipitation using acetone. The protein was hydrolised using trypsin, then the resulting hydrolyzate was fractionated using a cation exchange column with a variation pH of the elution buffer. The fractions were tested for antibacterial activity against the bacteria Escherichia coli and Staphylococcus aureus by the disc diffusion method. The fraction with the strong antibacterial activity was subjected for High-Resolution Mass Spectroscopy (HRMS) analysis for peptide identification. Protein extraction from castor beans by acetone precipitation was successfully performed with 66.88% of rendement. Protein hydrolysis using trypsin resulted in a degree of hydrolysis 75.16%. Antibacterial activity tests showed that pH fractions 6 and 7 had the largest inhibition zones of 16.00 mm and 12.00 mm, respectively against E. coli bacteria. The inhibition zones of those fractions against S. aureus are 17.00 mm and 14.50 mm, respectively. Analysis using High Resolution Mass Spectroscopy (HRMS) of pH fraction 6 identified 2 peptides with the amino acid sequence TFVTEGMR and MATATGSSSK while in pH fraction 7 identified 4 peptides, namely by acid sequence amino SVTLLDTGSRPALPLWVLEMPIVR, MDRGWKPNVEISPNCPR, GTEEALVNRAGDLFNFMR, and RLGASFGANLR.

Kata Kunci : enzim tripsin, jarak kepyar, hidrolisis protein, peptida antibakteri, presipitasi protein