EFEK DEFISIENSI BMPR2 PADA SEL MAKROFAG TERHADAP EKSPRESI MRNA MCP-1 DAN MRNA IL-6

NATHANAEL VETRA P, dr. Dwi Aris Agung N, M.Sc., Ph.D; dr. Widya Wasityastuti,M.Sc.,M.Med.Ed.,Ph.D

2022 | Skripsi | S1 KEDOKTERAN

Latar Belakang: Hipertensi arteri pulmonal, atau HAP adalah salah satu sub kelompok dari penyakit hipertensi paru yang ditandai dengan adanya peningkatan tekanan dan tahanan pada pembuluh darah paru - paru. Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, mutasi dari Bone Morphogenetic Protein Receptor 2 (BMPR2) memiliki keterkaitan dengan penurunan fungsional dari pembuluh darah pulmoner, sehingga diketahui memiliki keterkaitan kuat dengan perjalanan penyakit HAP. MCP-1 yang bertindak sebagai mediator melalui mekanisme autokrin dan/atau parakrin untuk menginduksi migrasi dan aktivasi sel monosit/makrofag sebagai salah salah satu inflamatorik, serta IL-6 yang merupakan sitokin proinflamatori dirasa perlu untuk dikaji lebih lanjut mengenai keterkaitannya dengan BMPR-2 dalam proses perjalanan penyakit HAP. Tujuan: mencari tahu keterkaitan antara mutasi BMPR2 dengan ekspresi mRNA MCP-1 dan IL-6 pada sel makrofag. Metode: knockout gen BMPR2 pada sel makrofag RAW 264,7 dilakukan menggunakan metode CRISPR/Cas9. Selanjutnya ekspresi mRNA MCP-1 dan IL-6 diamati setelah dilakukan amplifikasi menggunakan PCR. Kemudian hasilnya dibandingkan dengan hasil dari sel makrofag RAW 264,7 tanpa knockout gen BMPR2. Hasil: ekspresi yang ditunjukkan oleh rerata rasio mRNA MCP-1 dan IL-6 yang dibandingkan dengan GAPDH sebagai housekeeping gene, ditemukan lebih rendah pada sel makrofag RAW 264.7 dengan knockout gen BMPR2 bila dibandingkan dengan sel makrofag RAW 264.7 kontrol tanpa knockout gen BMPR2. Kesimpulan: pada makrofag RAW 264.7 yang dilakukan knockout gen BMPR2 didapatkan hasil ekspresi mRNA MCP-1 dan mRNA IL-6 yang lebih rendah apabila dibandingkan dengan sel makrofag RAW 264.7 yang tidak dilakukan knockout gen BMPR2.

Background: Pulmonary arterial hypertension, or PAH, is a subgroup of pulmonary hypertension which is characterized by increased pressure and resistance in the pulmonary blood vessels. Based on research that has been done, mutations in Bone Morphogenetic Protein Receptor 2 (BMPR2) have a relationship with functional decline of pulmonary blood vessels cells, which are associated with the remodeling process and inflammatory activity, so it is known to have a relatively strong relationship with the course of the disease. HAP. Monocyte Chemoattractant Protein-1 or MCP-1 is known to have a role as a mediator that induces the migration and activation of monocytes/macrophages to a tissue. Interleukin-6 or IL-6 is a proinflammatory cytokine that has been shown to increase in previous studies in BMPR2-deficient subjects. Therefore, MCP-1 and IL-6 need to be studied further regarding their relationship with BMPR-2 in the process of PAH pathogenesis. Aim: the aim of this study is to find the association between BMPR2 mutations and MCP-1 and IL-6 mRNA expression from macrophages. Methods: knockout of the BMPR2 gene on RAW 264.7 macrophage cells were done using the CRISPR/Cas9 method. The mRNA expression of MCP-1 and IL-6 were observed after amplified by using PCR. Then the results were compared with the results from RAW 264.7 macrophage cells that without knocked out BMPR2 gene . Results: The expression that showed by the mean ratio of MCP-1 and IL-6 mRNA compared with GAPDH as a housekeeping gene, was found to be lower in RAW 264.7 macrophage cells with BMPR2 gene knockout when compared to control RAW 264.7 macrophage cells without BMPR2 gene knockout. Conclusion: RAW 264.7 macrophage cells with knocked out BMPR2 gene had a lower expression of MCP-1 mRNA and IL-6 mRNA compared with RAW 264.7 macrophage cells without knocked out BMPR2 gene.

Kata Kunci : hipertensi arterial pulmonal, BMPR2, makrofag, MCP-1, IL-6