EKSTRAK Ocimum sanctum Linn. MENCEGAH APOPTOSIS PADA MODEL IN VITRO NEURODEGENERASI (SEL PC12) YANG DIINDUKSI OLEH TRIMETHYLTIN

DINDA ALIFFIA, Dr. med. vet. drh. Hevi Wihadmadyatami, M.Sc.

2022 | Skripsi | S1 KEDOKTERAN HEWAN

Penyakit neurodegenerasi merupakan penyakit yang ditandai dengan hilangnya fungsi neuron pada sistem saraf. Kemangi atau Ocimum sanctum Linn. diketahui memiliki potensi sebagai neuroproliferatif. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis peran anti apoptosis ekstrak etanolik Ocimum sanctum (EEOS) pada model in vitro penyakit neurodegenerasi. Sel PC12 dikultivasi menjadi enam kelompok perlakuan yaitu : kontrol negatif (non treated), kontrol positif (Trimethyltin (TMT) 10 mikro M), tiga perlakuan (10 mikro M TMT dengan konsentrasi EEOS 50,75, dan 100 mikro g/ml), dan pembanding (Donepezil HCl 1 mikro M). Cell line PC12 dikultur pada media DMEM dan diberi perlakuan dengan TMT, EEOS, dan Donepezil HCl. Pengaruh anti apoptosis EEOS terhadap sel PC12 dianalisis dengan uji MTT dan uji CCK-8, ekspresi caspase-9 dan caspase-3 dianalisis dengan Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Analisis fragmentasi nukleus dan apoptosis pada sel PC12 diketahui melalui pewarnaan Hoechst 33342 dan pewarnaan Acridine Orange/Propidium Iodide (AO/PI). Data yang diperoleh dari perlakuan (EEOS) pada sel PC12 yang diinduksi TMT dianalisis dengan uji One Way ANOVA menggunakan GraphPad Software versi 7 dan analisis semi kualitatif. Hasil uji MTT dan uji CCK-8 menunjukkan bahwa pemberian awal EEOS secara signifikan meningkatkan viabilitas sel yang diinduksi oleh Trimethyltin. Uji ELISA menunjukkan EEOS dengan konsentrasi 50,75, dan 100 mikro g/ml dapat menurunkan ekspresi caspase-9 dan caspase-3. Pemberian EEOS dapat mencegah fragmentasi nukleus dan apoptosis sel PC12 pada pewarnaan Hoechst 33342 dan Acridine Orange/Propidium Iodide (AO/PI). Berdasarkan hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa EEOS dapat melindungi sel PC12 yang dimediasi oleh penurunan regulasi caspase-9 dan caspase-3.

Neurodegeneration disease is a disease characterized by loss of neuron function in the nervous system. Basil or Ocimum sanctum Linn. is known to have neuroproliferative potentials. This study aimed to analyze the Ocimum sanctum ethanolic extract's antiapoptotic role in the in vitro model neurodegeneration disease. PC12 cells were cultivated into six treatment groups ; negative control (non-treated), positive control (Trimethyltin (TMT) 10 micro M), treatment groups (10 micro M with EEOS concentration 50,75, and 100 micro g/ml), and comparison (Donepezil HCl 1 micro M). The PC12 cell lines were cultivated using DMEM, treated with the Trimethyltin, EEOS, and Donepezil HCl. The anti-apoptotic effect of EEOS on PC12 cells was analyzed through MTT assay and the CCK-8 assay for PC12 cell viability, and the expression of caspase-9 and caspase-3 were analyzed by Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Nuclear fragmentation analysis and apoptosis in PC12 cells were identified through Hoechst 33342 staining and Acridine orange/Propidium Iodide (AO/PI) staining. The data obtained from the treatment of Ocimum sanctum ethanolic extract (EEOS) on TMT induced PC12 cells were analyzed by One Way ANOVA using GraphPad Software version 7 and semi-qualitative analysis. The MTT assay and CCK-8 assay showed that EEOS pre-treatment significantly increased the viability of TMT-induced apoptotic cells. The ELISA test showed that EEOS with a concentration of 50,75, and 100 micro g/ml was optimal in reducing the expression of caspase-9 and caspase-3 in the PC12 cell. EEOS prevented nuclear fragmentation and apoptotic cell, which was confirmed by Hoechst 3342 and Acridine Orange/Propidium Iodide (AO/PI) staining. Based on the result, it can be concluded that the EEOS can protect the PC12 cell line mediated by downregulation caspase-9 and caspase-3.

Kata Kunci : Apoptosis, EEOS, Neurodegenerasi, Sel PC12.