EKSTRAK ETANOLIK Ocimum sanctum LINN. SEBAGAI NEUROPROTEKTAN PADA MODEL IN VITRO PENYAKIT NEURODEGENERATIF (SEL SH-SY5Y) YANG DIINDUKSI OLEH TRIMETHYLTIN

DINDA AYU RAMADHANI, Dr.med.vet. drh. Hevi Wihadmadyatami, M.Sc.

2022 | Skripsi | S1 KEDOKTERAN HEWAN

Penyakit neurodegeneratif adalah penyakit yang disebabkan adanya perubahan patologi berupa atropi atau apoptosis pada neuron, sehingga terjadi disfungsi neuron. Ocimum sanctum Linn. atau kemangi adalah tanaman yang banyak digunakan sebagai sayuran dan obat tradisional. Berdasarkan penelitian, kemangi berpotensi sebagai antiinflamasi, antikanker, dan antioksidan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanolik Ocimum sanctum Linn. (EEOS) dalam menghambat apoptosis melalui jalur caspase 3 dan caspase 9 pada in vitro model neurodegenerasi (Sel SH-SY5Y). Sel SH-SY5Y dikultivasi pada media DMEM/F12, kemudian diberi EEOS bertingkat (50 µg/ml, 75 µg/ml, dan 100 µg/ml), Donepezil HCl 1uM diberikan sebagai pembanding, kemudian diinduksi TMT (10 µM). Uji viabiltas sel dilakukan dengan uji MTT dan CCK-8. Ekspresi Caspase 3 dan Caspase 9 dianalisis dengan ELISA. Pengamatan morfologi sel yang mengalami apoptosis dilakukan dengan pewarnaan Hoechst 33342 dan Acridine Orange/Propidium Iodide (AO/PI). Data yang diperoleh dianalisis secara semikuantitatif dan statistik menggunakan GraphPad Software version 7 dengan metode One Way ANOVA. Hasil uji MTT dan CCK-8 menunjukkan bahwa pemberian pre-terapi EEOS mampu meningkatkan viabilitas dan menurunkan ekspresi caspase 3 dan caspase 9 sel SH-SY5Y yang diberi TMT. EEOS juga dapat mencegah fragmentasi nukleus dan apoptosis sel SH-SY5Y pada pewarnaan Hoechst 33342 dan (AO/PI). Dapat disimpulkan bahwa EEOS dapat melindungi sel SH-SY5Y yang dimediasi oleh penurunan regulasi faktor apoptosis.

Neurodegenerative diseases are diseases caused by changes in pathology in the form of atrophy or apoptosis in neurons, resulting in neuron dysfunction. Ocimum sanctum Linn. or basil is a plant that is widely used as a vegetable and traditional medicine. Based on research, basil has the potential to be anti-inflammatory, anticancer, and antioxidant. This study aims to determine the effect of ethanolic extract of Ocimum sanctum Linn. (EEOS) in inhibiting apoptosis through caspase 3 and caspase 9 pathways in in vitro neurodegenerative models (SH-SY5Y cells). SH-SY5Y cells were cultivated on DMEM/F12 media, then given EEOS (50 μg/ml, 75 μg/ml, and 100 μg/ml), Donepezil HCl 1uM was given as a comparison, then induced TMT (10 μM). The viability test was performed with MTT and CCK-8 tests. Expressions of Caspase 3 and Caspase 9 were analyzed with ELISA. Morphological observations of cells undergoing apoptosis were carried out by staining Hoechst 33342 and Acridine Orange/Propidium Iodide (AO/PI). The data obtained were analyzed semiquitatively and statistically using GraphPad Software version 7 using the One Way ANOVA method. The results of the MTT and CCK-8 tests showed that the pre-therapy of EEOS was able to increase viability and decrease the expression of caspase 3 and caspase 9 sh-SY5Y cells given TMT. EEOS may also prevent nucleus fragmentation and SH-SY5Y cell apoptosis in Hoechst 33342 and AO/PI stainings. It can be concluded that EEOS can protect SH-SY5Y cells mediated by a decrease in the regulation of apoptotic factors.

Kata Kunci : Apoptosis, ekstrak etanol Ocimum sanctum Linn., neurodegenerasi, sel SH-SY5Y