THE EFFECT OF ETHANOLIC EXTRACT OF COMBINATION OF NERIUM indicum MILL AND TITHONIA diversifolia (HEMSLEY) A. GRAY TOWARDS COLLAGEN DEPOSITION IN KELOID FIBROBLAST USING SIRIUS RED STAINING METHOD

NADIRA ULIMASARI, Prof. Dr. Dra. Mae Sri H. W., Apt., M.Si; Dr. Med. dr. Indwiani A.

2019 | Skripsi | S1 KEDOKTERAN

Latar belakang: Keloid merupakan luka abnormal yang terbentuk setelah adanya trauma, inflamasi, operasi, luka bakar, atau bahkan muncul secara spontam. Salah satu karakteristik dari keloid adalah meningkatnya akumulasi kolagen yang membentuk massa kolagen tipikal yang membedakan keloid dari luka normal. Keloid sering menimbulkan kekhawatiran karena mengganggu secara estetika. Saat ini ada beberapa pengobatan keloid yang tersedia, namun penatalaksaan keloid tetap menjadi tantangan klinis karena belum ada yang terbukti secara optimal. Penelitian untuk mengembangkan pengobatan efektif dilakukan termasuk menggunakan bahan herbal. Nerium indicum Mill dan Tithonia diversifolia (Hemsley) A. Gray adalah bahan herbal yang diketahui memiliki sifat anti-kanker. Penelitian sebelumnya telah dilakukan menggunakan ekstrak N. indicum terstandardisasi 5-α Oleandrin dan Tithonia diversifolia secara individu menunjukan kemampuan untuk menghambat deposisi kolagen pada kultur fibroblast keloid. Akan tetapi menurut Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia (BPOM no. HK.00.05.23.3644), penggunaan N. indicum telah direstriksi sebagai bahan suplemen makanan. Ekstrak kombinasi dengan T. diversifolia diharapkan dapat mengurangi efek samping dan memaksimalkan potensial anti-keloid. Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan untuk mengamati penghambatan penimbunan kolagen oleh campuran ekstrak etanol N. indicum dan T.diversifolia pada fibroblast keloid. Tujuan: Mengkaji efek campuran ekstrak etanol N. indicum Mill dan Tithonia diversivolia (Hemsley) A. Gray terhadap penimbunan kolagen pada fibroblas keloid menggunakan metode pengecatan sirius red. Metode: Penelitian in vitro ini menggunakan kultur fibroblast keloid sebagai subjek dan campuran ekstrak etanol N. indicum Mill dan Tithonia diversivolia (Hemsley) A. Gray. Tes sitokimia dilakukan pada kultur fibroblas keloid dengan memberikan 8-serial konsentrasi dari campuran ekstrak etanol dengan waktu inkubasi 48 jam. Timbunan kolagen akan tergambarkan oleh kultur fibroblast yang diwarnai menggunakan pengecatan sirius red, lalu absorbansi dibaca menggunakan ELISA multiple reader. Hasil akan dianalisis menggunakan probit regresi dan nilai EC50 akan didapatkan. Hasil dan kesimpulan: Campuran ekstrak etanol N. indicum Mill dan Tithonia diversivolia (Hemsley) A. Gray dapat menginhibisi timbunan kolagen terbentuk pada kultur fibroblas keloid dengan nilai EC50 0.399 ± 0.13 µg/mL pada waktu inkubasi 48 jam.

Background: Keloid is an abnormal scar that occurs following trauma, inflammation, surgery, burns or sometimes spontaneously. One of its characteristics is increased collagen accumulation that produces the typical collagenous mass that distinguishes it from a normal scar. Keloids are often concerning because they can be disfiguring aesthetically. Current therapies for keloid are available, but keloid management remains a difficult clinical problem as no optimal treatment for keloid has yet to be determined. New studies have been conducted to develop effective treatment using herbal ingredients. Nerium indicum Mill and Tithonia diversifolia (Hemsley) A. Gray are herbal ingredients that are known to have anti-cancer potential properties. Previous studies performed upon standardized Nerium indicum 5-α Oleandrin and Tithonia diversifolia individually have shown effects to inhibit collagen deposition of keloid fibroblast culture. However according to the Head of the Food and Drug Supervisory Agency Republic of Indonesia (ruling no. HK.00.05.23.3644), the use of N. indicum Mill has been restricted to use alone as food supplement. The combined extract is utilized to reduce the side effects and improve the anti-keloid potential. Thus, this study is done to observe the inhibition of collagen deposition of the combined ethanolic extract of N. indicum and T. diversifolia in keloid fibroblast. Objective: To study the effects of the combined ethanolic extract of N. indicum Mill and T. diversifolia (Hemsley) A. Gray towards collagen deposition in keloid fibroblast using Sirius Red staining method Method: This in vitro study uses keloid fibroblast culture as the subject and the combined ethanolic extract of N. indicum Mill and T. diversifolia (Hemsley) A. Gray. The cytochemical test was performed on fibroblast keloid culture by giving eight serial concentration of the combined ethanolic extract with a 48-hour incubation time. The collagen deposition in keloid fibroblast culture was stained using Sirius Red method and the absorbance was read using ELISA reader. The result is analysed using Regression Probit to obtain the EC50 value. Result and Conclusion: The combined extract of N. indicum and T. diversifolia (1:9, w/w) can inhibit collagen deposition in keloid fibroblast culture with the EC50 value of 0.399 ± 0.13 µg/mL at 48-hour incubation time.

Kata Kunci : Keloid, Collagen, Nerium indicum, Tithona diversifolia