Produksi Antibodi Poliklonal Viral Nervous Necrosis (VNN) Sebagai Perangkat Uji Secara Imunohistokimia Dibandingkan dengan Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR)

ARIEF SULISTIYONO, Prof. drh. Kurniasih, M.VSc., Ph.D.; Dr. drh. Tri Untari, M.Si

2020 | Tesis | MAGISTER SAINS VETERINER

Ikan kerapu Cantang (Epinephelus fuscoguttatus x Epinephelus lanceolatus) adalah salah satu komoditas perikanan laut yang memiliki peluang baik di pasar domestik maupun internasional. Budidaya ikan laut di perairan Indonesia sebagian besar dirugikan oleh wabah penyakit virus, misalnya, yang disebabkan oleh Viral Nervous Necrosis (VNN). Penelitian bertujuan untuk memproduksi antibodi poliklonal VNN, untuk mendeteksi VNN secara imunohistokimia (IHK) dan molekuler, dan untuk mengetahui cluster VNN pada ikan kerapu cantang di Lombok. Dua kelinci New Zealand (Oryctolagus cuniculus) berumur delapan bulan jantan, berat kurang lebih 2 kg divaksinasi terhadap penyakit VNN setiap minggu dalam dosis 0,50 cc, 1,00 cc, 2,00 cc, dan 3,00 cc dengan injeksi intra-peritoneal. Serum kelinci dipanen pada minggu keenam, dipresipitasi dengan ammonium sulfat, dan didialisis dengan membran dialisis tiga kali untuk mendapatkan imunoglobulin sebagai antibodi primer. Sepuluh kerapu cantang berbagai ukuran dengan gejala berenang tidak teratur di permukaan air dan warna tubuh lebih gelap diambil dari Lombok Timur (delapan ekor) dan Lombok Tengah (dua ekor). Otak, mata, dan limpa kerapu yang terinfeksi, diproses untuk jaringan histologi, diwarnai dengan Hematoxylin dan Eosin dan metode imunohistokimia. Hasil pemeriksaan histopatologi dengan pewarnaan Hematoxylin dan Eosin menunjukkan adanya vakuola pada ketiga organ tersebut, sedangkan hasil positif IHK terlihat warna coklat tua sebagai reaksi antigen-antibodi pada jaringan. Hasil positif ini didukung oleh uji molekuler Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) dengan primer Nishizawa (OIE): R3: 5 '-CGA GTC AAC ACG GGT GAA GA-3' dan F2: 5 '-CGT GTC AGT CAT GTG TCG CT-3'. Empat sampel dari Lombok Timur dan dua sampel dari Lombok Tengah yang diuji RT-PCR mengindikasikan hasil positif VNN. Penelitian menunjukkan bahwa antibodi poliklonal VNN yang diproduksi sensitif untuk pengujian IHK pada jaringan ikan kerapu; hasil uji IHK positif terinfeksi VNN pada ikan kerapu cantang di Lombok juga positif dengan uji RT-PCR; VNN di Lombok masuk satu cluster dengan VNN yang berada di Gondol, Indonesia berdasarkan variasi gennya.

Cantang grouper fish (Epinephelus fuscoguttatus x Epinephelus lanceolatus) is one of the marine fisheries commodities that have opportunities both in the domestic and international markets. The cultivation of marine fish in Indonesian waters has been largely harmed by outbreak of viral diseases, for example, those caused by Nervous Necrosis Virus (NNV). The aims of study are to produce NNV polyclonal antibodies, to detect VNN by immunohistochemistry (IHC) and molecularly, and to find out the NNV clusters in grouper fish in Lombok. Two New Zealand rabbits (Oryctolagus cuniculus) of 8 months old males, 2 kg of weigh were vaccinated against NNV disease each week in dose of 0.50 cc, 1.00 cc, 2.00 cc, and 3.00 cc by intra-peritoneal injection. The rabbit serum was harvested in the sixth week activated, precipitated by ammonium sulfate, and dialyzed by dialysis membrane three times to obtain immunoglobulin as the primary antibody. Ten fishes of various sizes with symptoms of irregular swimming on the surface of the water and a darker body color were taken from East Lombok (eight fishes) and Central Lombok (two fishes). The infected fish brain, eyes and spleen were processed for histological and stained with Hematoxylin and Eosin and immunohistochemical method with polyclonal antibody. Histopathological with Hematoxylin and Eosin staining showed vacuoles in these organs, while IHC results were indicated by the discovery of a dark brown color in the samples. These positive results were supported by molecular tests of Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) with Nishizawa primer (OIE): R3: 5 '-CGA GTC AAC ACG GGT GAA GA-3' and F2: 5 '-CGT GTC AGT CAT GTG TCG CT-3 '. Four samples from East Lombok and two samples from Central Lombok tested by RT-PCR indicated positive results of NNV. Research shows that the produced VNN polyclonal antibody were sensitive for IHC testing in grouper tissue; the results of the positive IHC test infected with VNN on the grouper fish in Lombok were also positive with the RT-PCR test; VNN in Lombok was in one cluster with VNN in Gondol, Indonesia based on the variation of genes.

Kata Kunci : Kerapu Cantang (Epinephelus fuscoguttatus x Epinephelus lanceolatus), Viral Nervous Necrosis, Imunohistokimia, Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction