Pengaruh Kombinasi Mimic miR-155-5p dan Antagonist miR-324-5p Encapsulated Kitosan pada Sel Kanker Ovarium SKOV3

RAHMA BERLIANTI S, Prof. dr. Sofia Mubarika H., M.Med.Sc. PhD; Dr. Med. dr. Indwiani Astuti

2020 | Tesis | MAGISTER BIOTEKNOLOGI

Latar Belakang: Kanker ovarium adalah tumor ganas yang menyerang alat reproduksi wanita. Menurut data dari Center for Disease Control and Prevention, kanker ovarium merupakan kanker ginekologi dengan tingkat five year survival rate terendah dari kanker ginekologi di dunia, yaitu sebesar 43 persen. MikroRNA diketahui memiliki keterkaitan dengan prognosis buruk kanker ovarium. Pada kanker ovarium diketahui miR-155-5p yang berperan sebagai tumor supresor miR mengalami downregulasi menyebabkan upregulasi onkoprotein HIF1 alfa. Ekspresi miR-324-5p yang berperan sebagai onkomiR mengalami upregulasi yang menyebabkan upregulasi GLI1. Kitosan adalah polisakarida tersusun dari dua subunit D-glukosamin dan N-asetil-D-glukosamin dengan ikatan (1,4) glikosidik. Kitosan digunakan sebagai sistem penghantaran mikroRNA ke dalam sel target. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kombinasi mimic miR-155-5p dan antagonist miR-324-5p dienkapsulasi kitosan dan mengetahui peran terapi kombinasi kitosan mimic-antagonist pada sel kanker ovarium SKOV3. Metode: Nanopartikel kitosan (NPs-Cs) dibuat dengan metode gelasi ionik dengan natrium tripolifosfat sebagai cross-linker. Karakterisasi NPs-Cs menggunakan elektroforesis dan TEM. MTT assay dan qRT-PCR untuk menentukan efek perlakuan. Data diolah menggunakan analisis statistik: Independent Sample T-Test, One way ANOVA dan software: Biorad CFXmanager dan GenEx 7. Hasil: kombinasi miRNA-kitosan mampu menghambat viabilitas sel sebesar 40 persen pada konsentrasi 100 nm. Ekspresi miR-155-5p endogen meningkat (P<0.05) seiring dengan menurunnya ekspresi mRNA HIF1 alfa. Ekspresi miR-324-5p setelah diberi perlakuan menurun (P<0.05) diikuti dengan penurunan ekspresi GLI1. Kesimpulan: Kombinasi mimic miR-155-5p dan antagonist miR-324-5p dienkapsulasi kitosan dapat dipertimbangkan sebagai kandidat terapi target pada kanker ovarium.

Objective: Ovarian cancer is a malignant tumor that attacks the female reproductive organs. According to data from the Center for Disease Control and Prevention, ovarian cancer is a gynecological cancer with the lowest five year survival rate of gynecological cancer in the world, which is 43 persen. MicroRNA is known to be related to the poor of ovarian cancer prognosis. In ovarian cancer, downregulating of miR-155-5p is known to act as a tumor suppressor miR causing upregulation of HIF1 alfa oncoprotein. Whereas miR-324-5p which acts as oncomiR upregulating causing upregulation of GLI1. Chitosan is a polysaccharide composed of two D-glucosamine and N-acetyl-D-glucosamine subunits with glycosidic (1,4) bonds. Chitosan is used as a microRNA delivery system into the target cell. This study aims to determine the combination of miR-155-5p mimic and miR-324-5p antagonist encapsulated chitosan and determine the role of chitosan mimic-antagonist combination therapy in SKOV3 ovarian cancer cells. Methods: Chitosan nanoparticles (NPs-Cs) were made by ionic gelation method with sodium tripolyphosphate as a cross-linker. Characterization of NPs-Cs using electrophoresis and TEM. MTT assay and qRT-PCR to determine treatment effects. Data were processed using statistical analysis: Independent Sample T-Test, One way ANOVA and software: Biorad CFXmanager and GenEx 7. Result: miRNA-chitosan combination can inhibit cell viability by 40 persen at a concentration of 100 nm. Endogenous miR-155-5p expression increases (P<0.05) with decreasing HIF1 alfa mRNA expression. MiR-324-5p expression after treatment was decreased (P<0.05) followed by decreased GLI1 expression. Conclusion: this study successfully presented effects of combination of mimic miR-155-5p and antagonist miR-324-5p encapsulated chitosan which be considered as a potential therapy targets for ovarian cancer.

Kata Kunci : mimic miR-155-5p, antagonist miR-324-5p, Nanopartikel Kitosan, SKOV3, Kanker Ovarium