EKSPLORASI POTENSI ANTIKANKER DAUN SIRSAK (Annona muricata L.) MELALUI KAJIAN JALUR ROS INTRASELULER PADA KANKER PAYUDARA TRIPLE NEGATIVE

Irfani Aura Salsabila, Prof. Dr. Edy Meiyanto M.Si., Apt

2019 | Skripsi | S1 FARMASI

Ekstrak daun sirsak (EDS) telah banyak diteliliti aktivitas sitotoksiknya pada berbagai jenis sel kanker. Sel kanker payudara triple negative memiliki karakteristik level reactive oxygen species (ROS) yang tinggi. Tujuan dari penelitian ini adalah mengeksplorasi aktivitas antikanker EDS dengan mengevaluasi efek sitotoksik dan efek peningkatan ROS intraseluler dari EDS baik perlakuan tunggal maupun kombinasinya dengan doxorubicin pada sel 4T1 yang memiliki karakteristik highly metastatic. Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Identifikasi kandungan senyawa dalam EDS dilakukan dengan kromatografi lapis tipis (KLT) dengan fase gerak butanol:etil asetat:air (5:4:1) didukung dengan penetapan flavonoid total dengan secara spektrofotometri. Pengujian efek sitotoksik EDS baik tunggal maupun kombinasinya dengan doxorubicin dilakukan dengan cara MTT assay dengan parameter IC 50 .Sementara pengukuran level ROS intraseluler dilakukan dengan DCFDA staining assay menggunakan flowcytometry. Ekstraksi daun sirsak menghasilkan rendemen sebanyak 10,10%. Profil kromatogram EDS menunjukkan bahwa EDS memiliki bercak dengan Rf yang sama dengan pembanding quercetin (hRf= 0,70) yang merupakan senyawa golongan flavonoid.Uji kandungan flavonoid total di dalam EDS diperoleh sebanyak 2,3 ± 0,05 % b / b ekstrak. EDS menunjukkan efek sitotoksik terhadap sel 4T1 dengan nilai IC 50 sebesar 63,33 ± 6,847 µg/mL. Sementara kombinasi EDS pada konsentrasi 25 µg/mL dengan doxorubicin pada dosis 10 nM menurunkan % viabilitas sel 4T1 hingga 58%. Selain itu ternyata EDS pada konsentrasi 12,5 dan 25 µg/mL menurunkan level ROS intraseluler baik pada perlakuan tunggal maupun kombinasinya dengan doxorubicin. Hasil-hasil ini menunjukkan bahwa sifat sitotoksik EDS tidak disebabkan oleh peningkatan level ROS intraseluler. Secara keseluruhan dapat dikatakan bahwa EDS memiliki potensi yang dapat dikembangkan sebagai agen anti kanker (atau ko- kemoterapi) sekaligus sebagai antioksidan.

Annona muricata L. extract (AME) has been investigated by its cytotoxic activity on various types of cancer cells. Triple negative breast cancer cells are characterized by the high level of reactive oxygen species (ROS). The aim of this study was to explore the anticancer activity of AME with cytotoxic enhancement effects and the effect on intracellular ROS in 4T1 cells.. Extraction was carried out using maceration mwthod by using ethanol 96% solvent. Identification of phytochemical contents in AME was carried out by thin layer chromatography (TLC) with the mobile phase of butanol: ethyl acetate: water (5:4:1) supported by the determination of total flavonoids contents by spectrofotometry. The cytotoxic effects of both single and in combination with doxorubicin then evaluated by MTT assay with IC 50 as its parameters. While the measurement of intracellular ROS level was carried out with DCFDA staining assay using flowcytometry. The chromatogram profile shows that AME has flavonoids content proven by quercetin as the comparison (hRf = 0.70) of the flavonoid group compound. It was confirmed with the result of its total flavonoid contentas much as 2,3 ± 0,05 % xiii w /w. In a single treatment AME gives an IC 50 value of 63,33 ± 6,847 µg/mL. While the combination of AME at a concentration of 25 µg / mL with doxorubicin at a dose of 10 nM decreased % viability of 4T1 cells to 58%. In addition, it turned out that AME at concentrations of 12.5 and 25 µg / mL decreased intracellular ROS levels both in single treatment and in combination with Doxorubicin. hese results indicate that the cytotoxic properties of AME are not caused by an increase in intracellular ROS levels. However it shows that AME has the potential to be developed as an anticancer agent as well as an antioxidant.

Kata Kunci : Kanker payudara triple negative, Sitotoksik, ROS, Annona muricata L./Triple Negative Breast Cancer, Cytotoxic, ROS, Annona muricata L.