IDENTIFIKASI DAN ANALISIS ASOSIASI POLIMORFISME GEN KiSS1 TERHADAP LEVEL 17BETA-ESTRADIOL DAN PROGESTERON PADA KAMBING KALIGESING

GALY HARDYTA, Ir. Dyah Maharani, S.Pt., M.P., Ph.D., IPM.; Ir. Diah Tri Widayati, M.P., Ph.D., IPM.

2019 | Tesis | MAGISTER ILMU PETERNAKAN

Gen KiSS1 merupakan pengkode neuropeptida kisspeptin yang berperan penting dalam sinyal sistem reproduksi. Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi polimorfisme gen KiSS1 pada populasi kambing Kaligesing dan hubungannya dengan sifat reproduksi. Sejumlah 48 ekor kambing diidentifikasi genotipnya menggunakan metode sekuensing dan PCR-RFLP, 16 ekor di antaranya diamati fase estrus, kemudian dianalisis level 17β-estradiol dan progesteron menggunakan metode ELISA. Berdasarkan analisis hormonal, diperoleh rata-rata level 17β-estradiol pada fase folikuler adalah 6,25±2,44 pg/ml untuk kelompok level rendah, 22,32±13,02 pg/ml untuk kelompok level sedang dan 121,78±56,28 pg/ml untuk kelompok level tinggi. Level 17β-estradiol pada fase luteal adalah 7,21±2,17 pg/ml untuk kelompok level rendah, 13,91±2,86 pg/ml untuk kelompok level sedang dan 89,49±23,86 pg/ml untuk kelompok level tinggi. Rata-rata level hormon progesteron pada fase folikuler adalah 2,10±0,63 ng/ml untuk kelompok level rendah, 8,53±3,08 ng/ml untuk kelompok level sedang dan 43,57 ng/ml untuk kelompok level tinggi. Level progesteron pada fase luteal adalah 2,02±0,68 ng/ml untuk kelompok level rendah, 11,44±3,00 ng/ml untuk kelompok level sedang dan 46,84±21,67 ng/ml untuk kelompok level tinggi. Hasil sekuensing menunjukkan ada polimorfisme, ditandai oleh adanya tiga Single Nucleotide Polymorphism (SNP) yaitu A56C, T125A dan C312T. Hanya SNP T125A yang digunakan untuk identifikasi genotip ternak menggunakan metode PCR-RFLP dengan enzim restriksi MboII. Hasilnya, terdapat 3 genotip yaitu TT, TA dan AA. Genotip TT tidak digunakan dalam analisis asosiasi, karena hanya ditemukan pada satu individu dari keseluruhan sampel. Frekuensi genotip TT, TA dan AA berturut turut adalah 2%, 58%, dan 40%. Frekueansi alel T dan A berturut-turut adalah 31% dan 69%. Distribusi genotip pada SNP T125A gen KiSS1 tidak menyimpang dari Hardy-Weinberg Equilibrium (x2=6,14; P<0,025). Analisis asosiasi antara polimorfisme gen KiSS1 terhadap sifat reproduksi kambing Kaligesing tidak menunjukkan hasil yang berbeda nyata. Disimpulkan bahwa polimorfisme gen KiSS1 (SNP T125A) hanya dapat digunakan untuk membedakan genotip antar ternak tetapi tidak dapat disarankan sebagai alat seleksi untuk level 17β-estradiol dan progesteron pada kambing Kaligesing.

Kisspeptins, encoded by KISS1 gene play na essential roles in the reproductive ability and the onset of puberty. The objective of this study was to assess the association of KiSS1 gene polymorphism with reproductive traits in Kaligesing goat. Genotypes of forty-eight ewes were determined using both PCR-RFLP and DNA sequencing. Sixteen out of 48 samples were monitored for the estrus cycle and determined their 17β-estradiol and progesterone levels using ELISA method. Hormonal analysis showed that the levels of 17β-estradiol in the follicular phase were 6,25±2,44 pg/ml for low level, 22,32±13,02 pg/ml for medium level and 121,78±56,28 pg/ml for high level. The levels of 17β-estradiol in the luteal phase were 7,21±2,17 pg/ml for low level, 13,91±2,86 pg/ml for medium level and 89,49±23,86 pg/ml for high level. The levels of progesterone hormone in the follicular phase were 2,10±0,63 ng/ml for low level, 8,53±3,08 ng/ml for medium level and 43,57 ng/ml for high level. The levels of progesterone in the luteal phase were 2,02±0,68 ng/ml for low level, 11,44±3,00 ng/ml for medium level and 46,84±21,67 ng/ml for high level. The results showed that KISS1 gene in the studied population was polymorphic with three single nucleotide polymorphism SNPs A56C, T125A dan C312T. Only SNP T125A was futher used to genotype all individuals by PCR-RFLP method using MboII restriction enzyme. Three genotypes (TT, TA and AA) were identified. Genotype frequencies of TT, TA and AA were 2%, 58%, and 40%, respectively, the allele frequencies of T and A were 31% and 69%, respectively. The genotype distribution for the SNP was not deviated the Hardy-Weinberg Equilibrium (x2=6.14; P<0.025). No significant associations of the polymorphism in KiSS1 gene were observed for any hormone trait. In conclusion, the SNP marker of KiSS1 gene is only suggested for genotyping of animals but not as a tool for selection of 17β-estradiol and progesterone level in Kaligesing goats.

Kata Kunci : 17β-estradiol, Kambing Kaligesing, KiSS1, Progesteron, Reproduksi