ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA ANTIOKSIDAN PENANGKAP RADIKAL DPPH KULIT BUAH NAGA MERAH (Hylocereus polyrhizus (F.A.C.Weber) Britton dan Rose) DAN UJI AKTIVITASNYA SEBAGAI IMUNOMODULATOR

SRI WAHDANINGSIH, Prof. Dr. Subagus Wahyuono, M.Sc., Apt; Prof. Dr. Sugeng Riyanto, MS., Apt; drh. Retno Murwanti, M.P., Ph.D

2018 | Disertasi | DOKTOR ILMU FARMASI

Tingkat konsumsi buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) yang semakin meningkat mengakibatkan banyaknya sisa kulit yang hanya dibuang sebagai sampah. Kulit buah naga merah ternyata menyimpan potensi yang cukup besar dalam pemanfaatannya sebagai antioksidan alami. Pada penelitian ini dilakukan isolasi, identifikasi dan uji aktivitas penangkap radikal DPPH dan imunomodulator secara in vitro berdasarkan kemampuan isolat dalam mempengaruhi aktivitas fagositosis makrofag, proliferasi limfosit dan nitrit oksid senyawa kulit buah H. polyrhizus. Uji aktivitas penangkap radikal DPPH dilakukan terhadap ekstrak, fraksi dan senyawa hasil isolasi, sedangkan uji aktivitas imunomodulator hanya dilakukan terhadap senyawa hasil isolasi. Ekstraksi dilakukan terhadap simplisia kering kulit buah H. polyrhizus menggunakan metode maserasi dengan pelarut metanol, dilanjutkan partisi menggunakan pelarut petroleum eter (PE) dan etil asetat (EA). Fraksinasi dilakukan terhadap fraksi larut PE dengan KCV dimaksudkan untuk memisahkan senyawa atau kelompok senyawa secara bertahap sesuai dengan urutan kepolarannya. Pemantauan golongan senyawa dan aktivitas penangkap radikal DPPH dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT) dan disemprot dengan penampak bercak DPPH dan serium sulfat. Isolasi dilakukan dengan menggunakan metode KLT preparatif. Elusidasi struktur isolat dilakukan menggunakan spektroskopi UV, FT-IR, MS, 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, dan HSQC. Hasil uji aktivitas penangkap radikal DPPH (IC50) adalah ekstrak metanol 241,19±3,01 mikrogram/mL, fraksi larut PE 3,84±0,07 mikrogram/mL, fraksi tidak larut PE 12,14±0,20 mikrogram/mL, fraksi larut EA 8,34±0,10 mikrogram/mL, fraksi tidak larut EA 46,80±0,59 mikrogram/mL, isolat 1 2.952, 14±0,02 mikrogram/mL dan isolat 2 25.636, 95±1,31 mikrogram/mL, sedangkan vitamin C 2,34±0,03 µg/mL. Pada uji aktivitas imunomodulator isolat 1 dan isolat 2 pada konsentrasi 100 mikrogram/mL, 50 mikrogram/mL, 25 mikrogram/mL, 12,5 mikrogram/mL dan 6,25 mikrogram/mL secara signifikan dapat meningkatkan aktivitas fagositosis makrofag, meningkatkan proliferasi sel limfosit dan mampu meningkatkan produksi nitrit oksida. Identifikasi struktur kimia terhadap senyawa hasil isolasi dapat diketahui bahwa isolat 1 adalah lupeol dan isolat 2 adalah beta sitosterol.

The more increasing consumption level of red dragon fruit (Hylocereus polyrhizus) affects the amount of unused remaining fruit peels. In fact, the peel of red dragon fruit is considerably potential for natural antioxidant. In this research, in vitro test of DPPH free radical-scavenging activity and immunomodulatory activity was performed based on the isolates ability to influence the macrophage phagocytic activity, the lymphocyte proliferation, and nitric oxide of H. Polyrhizus peels. The test of DPPH free radical-scavenging activity was applied to the extracts, fractions, and isolation-based compounds; the immunomodulatory activity test was only performed on isolation-based compounds. The extraction of simplisia of the dried peels was performed through maceration with methanol, partition with petroleum ether (PE) solvent and ethyl acetate (EA). The fractionation with vacuum liquid chromatography (VLC) was to systematically separate compounds or compound groups based on their polarity. The observation of compound groups and DPPH free radical-scavenging activity was performed through Thin Layer Chromatography (TLC) method and DPPH and cerium sulfate spots reagent spraying. The isolation was performed through preparative TLC. The elucidation of isolate structures was performed through spectroscopic techniques including UV, FT-IR, MS, 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, and HSQC. The free radical-scavenging activity test of DPPH (IC50) showed methanol extract (241,19±3,01 mikrogram/mL), soluble fraction PE (3,84±0,07 mikrogram/mL), insoluble fraction PE (12,14±0,20 mikrogram/mL), soluble fraction EA (8,34±0,10 mikrogram/mL), insoluble fraction EA (46,80±0,59 mikrogram/mL), isolate 1 (2.952, 14±0,02 mikrogram/mL), and isolate 2 (25.636, 95±1.31 mikrogram/mL), and vitamin C (2,34±0,03 mikrogram/mL). The immunomodulatory activity test showed that isolate 1 and 2 with concentrations of 100 mikrogram/mL; 50 mikrogram/mL; 25 mikrogram/mL; 12,5 mikrogram/mL and 6,25 mikrogram/mL could significantly improve the macrophage phagocytic activity, the lymphocyte proliferation, and the nitric oxide production. The identification of chemical structures of the isolates indicated that isolate 1 is lupeol, and isolate 2 is beta sitosterol.

Kata Kunci : H. polyrhizus, isolation, antioxidant, immunomodulator, lupeol, beta sitosterol