PENGARUH PEMBERIAN ASAM KLOROGENAT TERHADAP EKSPRESI GEN TOLL-LIKE RECEPTOR-4 (TLR-4), GEN MONOCYTE CHEMOATTRACTANT PROTEIN-1 (MCP-1), DAN MAKROFAG PADA MENCIT DENGAN CEDERA ISKEMIK-REPERFUSI GINJAL

INGESTI BILKIS ZULFATINA, dr. Nur Arfian, Ph.D.; dr. Nungki Anggorowati, Sp.PA, Ph.D.

2018 | Skripsi | S1 PENDIDIKAN DOKTER

Latar Belakang: Cedera iskemik-reperfusi (Ischemic Reperfusion Injury/IRI) merupakan penyebab terbanyak Acute Kidney Injury/AKI. Inflamasi yang diakibatkan cedera tersebut melibatkan TLR-4, MCP-1, dan makrofag. Asam klorogenat memiliki efek anti-inflamasi dan antioksidan terhadap hepar, otak, dan ginjal, tetapi hingga saat ini belum banyak diketahui perannya dalam menurunkan respon inflamasi pada cedera iskemik-reperfusi ginjal. Tujuan: Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui peran asam klorogenat dalam menurunkan inflamasi dengan melihat ekspresi TLR-4, MCP-1, dan jumlah makrofag (ekspresi CD68) pada mencit dengan cedera iskemik-reperfusi ginjal. Metode: Mencit jantan galur Swiss (n=25, usia 3-4 bulan, berat 30-40 gram) dibagi dalam 5 kelompok, yaitu kelompok Sham Operation sebagai kontrol (SO), kelompok dengan cedera iskemik-reperfusi (IR), dan tiga kelompok sisanya adalah kelompok dengan IR dan pemberian asam klorogenat sebanyak 3,5 mg/kgBB/hari (IRCGA-1), 7 mg/kgBB/hari (IRCGA-2), serta 14 mg/kgBB/hari (IRCGA-3). Model cedera iskemik-reperfusi dibuat dengan clamping pada pedikulus ginjal secara bilateral selama 30 menit. Mencit diterminasi pada hari ke-3 dan dilakukan pengambilan ginjal mencit untuk esktraksi RNA dan pembuatan blok parafin. Respon inflamasi dinilai dengan jumlah makrofag yang dicat dengan pewarnaan imunohistokimia CD68 serta ekspresi TLR-4 dan MCP-1 dengan RT-PCR. Hasil: Ketiga nilai ekspresi TLR-4, MCP-1, dan jumlah makrofag kelompok IR lebih tinggi (p<0,05) dibanding kelompok SO. Nilai ekspresi TLR-4 kelompok IRCGA-3 dibanding IR lebih rendah (p<0,05). Pada jumlah makrofag kelompok IRCGA-2 dan IRCGA-3 dibanding IR juga lebih rendah (p<0,05). Sedangkan, pada ekspresi MCP-1 kelompok IRCGA-1, IRCGA-2, dan IRCGA-3 lebih rendah dibanding IR, namun tidak ada perbedaan yang bermakna. Kesimpulan: Asam klorogenat diperkirakan mampu memperbaiki ekspresi TLR-4 dan jumlah makrofag secara signifikan.

Background: Ischemic-Reperfusion Injury (IRI) is major cause of Acute Kidney Injury (AKI). Inflammation caused by IRI involves TLR-4, MCP-1, as well as macrophage infiltration. Chlorogenic acid has anti-inflammatory and antioxidant effects on the liver, brain, and kidney, but it is not known for its role in the development of inflammation in renal ischemic reperfusion injury. Aim: The aim of this study is to determine the effect of chlorogenic acid in attenuating the inflammation, such as the expression of TLR-4, MCP-1, and number of macrophages (CD68 expression) in mice with renal ischemic reperfusion injury. Method: Male Swiss mice (n = 25, 3-4 months, 30-40 gram) were divided into 5 groups: Sham Operation group as control group (SO), group with ischemic reperfusion injury (IR), and three groups with IR and chlorogenic acid administration of 3.5 mg / kg / day (IRCGA-1), 7 mg / kgBW / day (IRCGA-2), and 14 mg / kgBW / day (IRCGA-3). The ischemic reperfusion injury model was performed by clamping on the renal pediculus bilaterally for 30 minutes. The mice were terminated on the 3rd day and kidneys were taken for RNA extraction and paraffin blocks making. The inflammatory response was assessed by looking at macrophage count with CD68 immunohistochemical staining and TLR-4 and MCP-1 expression using RT-PCR. Results: Three expression values of TLR-4, MCP-1, and macrophage count in IR over SO group were higher (p <0.05). The value of IRCGA-3 group of TLR-4 expression compared to IR was lower (p <0.05). In IRCGA-2 and IRCGA-3 group of the number of macrophages were lower than IR (p <0.05). Whereas, there was no significant difference in MCP-1 expression between IRCGA-1, IRCGA-2, and IRCGA-3 to IR. Conclusion: Chlorogenic acid is thought to be able to significantly improve TLR-4 expression and macrophage count.

Kata Kunci : Iskemik-Reperfusi, AKI, asam klorogenat, inflamasi, TLR-4, MCP-1, makrofag