AKTIVITAS HEPATOPROTEKTIF In vivo EKSTRAK KULIT AKAR SENGGUGU (Clerodendrum serratum (L.) Moon) DAN ISOLASI SENYAWA ANTIRADIKAL DPPH SECARA BIOASSAY GUIDED FRACTIONATION

NASRUDIN, Prof. Dr. Wahyono, SU., Apt.

2018 | Disertasi | S3 Ilmu Farmasi

Eksplorasi senyawa aktif dan aktivitas biologis C. serratum yang di Indonesia dikenal dengan nama senggugu telah banyak dilakukan utamanya spesies yang tumbuh di India. Namun, ekstrak kulit akar senggugu di Indonesia khususnya asal Imogiri yang diuji dengan aktivitas antiradikal DPPH dan hepatoprotektif belum dilaporkan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antiradikal DPPH ekstrak kulit akar senggugu asal Imogiri, mengetahui efek hepatoprotektif ekstrak etil asetat terhadap parameter biokimia darah tikus dan parameter stres oksidatif serta gambaran histopatologi sel hepar tikus juga mengisolasi dan menentukan struktur senyawa aktif antiradikal DPPH dengan metode bioassay guided fractionation. Serbuk kulit akar senggugu dimaserasi bertahap dengan n-heksan, etil asetat dan metanol. Ekstrak n-heksan, etil asetat dan metanol yang diperoleh diuji aktivitas antiradikal DPPH dan dibandingkan dengan rutin. Pada uji aktivitas hepatoprotektif ekstrak etil asetat digunakan dosis 25, 50 dan 100 mg/KgBB pada tikus diinduksi dengan CCl4. Aktivitas hepatoprotektif ekstrak ditentukan dari hasil analisis parameter biokimia darah (SGOT, SGPT, ALP, bilirubin dan total protein) dan stres oksidatif (MDA, GPx dan CAT) serta histopatologi sel hepar tikus. Fraksinasi ekstrak etil asetat dengan KCV yang dielusi secara bergradien menggunakan nheksan : etil asetat : metanol menghasilkan 10 fraksi (A-J). Dari pemisahan fraksi D dengan kromatografi kolom yang dielusi dengan n-heksan : etil asetat secara bergradien diperoleh isolat N1, N2, R1 dan R2. Dari pemisahan ekstrak metanol dengan kromatografi lapis tipis (KLT) preparatif menggunakan eluen etil asetat : aseton : asam format : air (5 : 3 : 0,5 : 1) diperoleh isolat Me1. Isolat yang diperoleh diuji kemurniannya dan dianalisis dengan GC-MS, 1H-NMR dan 13C-NMR. Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak n-heksan, etil asetat dan metanol berturut-turut 208,14 ± 8,20 mug/mL, 30,93 ± 1,53 mug/mL dan 12,63 ± 0,09 mug/mL, sedangkan rutin 1.74 ± 0,14 mug/mL. Efek ekstrak etil asetat mencegah peroksidasi lipid akibat induksi CCl4 berdasarkan parameter biokimia darah (SGPT, ALP, bilirubin dan total protein) maupun stres oksidatif ditunjukkan pada dosis 100 mg/KgBB yang berbeda signifikan dibandingkan kontrol CCl4 (p<0,05). Analisis histopatologi sel hepar menunjukkan bahwa pada dosis tersebut, ekstrak etil asetat sudah menunjukkan efek hepatoprotektif, namun masih lebih rendah dibanding kontrol silimarin. Berdasarkan analisis data spektra isolat N1 dimungkinkan adalah stigmast-7-en-3Beta-ol yang belum pernah dilaporkan sebagai konstituen C. serratum dan N2 adalah metil palmitat. Isolat R1 adalah bis(2-etilheksil) ftalat, dan R2 adalah pentadekanoat sedangkan isolat Me1 adalah kojic acid (5-hidroksi-2-(hidroksimetil)-4H-piran-4-on) merupakan senyawa yang juga belum pernah dilaporkan dari C. serratum. Senyawa ftalat dan kojic acid yang diverifikasi dalam ekstrak metanolik kulit akar senggugu dengan HPLC dan GC-MS tidak terdeteksi, namun belum bisa disimpulkan bahwa keduanya bukan senyawa dari senggugu.

Exploration for active compound and biological activities of C. serratum which in Indonesia is known as senggugu have been done many times before, mostly on the species that grown in India. However, senggugu root's bark extract from Indonesia, specifically from Imogiri that was tested with DPPH antiradical activities and hepatoprotective have yet to be reported. This study aims to determine the DPPH antiradical activity of senggugu root's bark from Imogiri, hepatoprotective effect of the ethyl acetate extract on biochemical parameters of rats blood, oxidative stress parameters, and histopathological description of the rats liver cells, isolating and determining the structure of DPPH antiradical compound using bioassay guided fractionation method. Senggugu root's bark powder extracted using fractional maceration with nhexane, ethyl acetate and methanol. n-hexane, ethyl acetate and methanol extracts that were obtained then tested for their antiradical activities using DPPH and compared to routine. Hepatoprotective activity was tested on the ethyl acetate extract using 25, 50 and 100 mg/Kg body weight of rats that was induced using CCl4. Hepatoprotective activity was determined by analyzing the rats blood biochemical parameters (SGOT, SGPT, ALP, bilirubin, total protein), oxidative stress parameters (MDA, GPx, and CAT) and liver cells histopathology. Fractionation of ethyl acetate extract using CVC that was eluded gradiently with n-hexane : ethyl acetate : methanol resulting in 10 fraction (A-J). Further separation of fraction D using column chromatography that was eluded gradiently with n-hexane : ethyl acetate yielding in isolate N1, N2, R1 and R2. Further separation from the methanol extract using preparative thin layer chromatography (TLC) using the eluent of ethyl acetate : acetone : formic acid : water (5 : 3 : 0,5 : 1) yielding in isolate Me1. The obtained isolate then was tested for its purity and analyzed using GC-MS, 1H-NMR and 13C-NMR. The result for antioxidant activity of n-hexane, ethyl acetate and methanol extracts consecutively are 208.14 ± 8.20 mug/mL, 30.93 ± 1.53 mug/mL dan 12.63 ± 0.09 mug/mL, while routine is 1.74 ± 0.14 mug/mL. The effect of ethyl acetate extract that prevents lipid peroxidation induced by CCl4 based on blood biochemical parameters (SGPT, ALP, billirubin and protein total)and oxidative stress parameters showed that on the dosage of 100 mg/Kg body weight is significantly different with control CCl4 (p<0.05). Histopathological analysis of the liver cells showed that on that dosage, the ethyl acetate extract already showed hepatoprotective effect, but it is lower than the silymarin control. Based on spectral analysis, isolate N1 is probably stigmast-7-en-3Beta-ol that haven't been reported as constituent of C. serratum and N2 is methyl palmitate. Isolate R1 is bis(2-ethylhexil) phtalat, and R2 is pentadecanoic while isolate Me1 is kojic acid (5-hydroxy-2(hydroxymethyl)-4Hpyran-4-on) that is also a compound that haven't been reported from C. serratum. Phthalate and kojic acid compounds that were verified in methanolic extracts of senggugu's root bark with HPLC and GC-MS were not detectable, but it can't be concluded that they are not constituent compounds of senggugu.

Kata Kunci : Clerodendrum serratum, antiradikal DPPH, hepatoprotektif, stigmast-7-en- 3Beta-ol, ftalat dan kojic acid