VALIDASI METODE ANALISIS CEMARAN DAGING BABI DALAM PANGAN OLAHAN DAGING(NUGET) DENGAN MENGGUNAKAN TEKNIKPOLYMERASE CHAIN REACTION-RESTRICTION FRAGMENT LENGTH POLYMORPHISM(PCR-RFLP); VALIDATION OF ANALYTICALMETHOD FOR PORCINE CONTAMINATION ON PROCESSED FOOD (NUGGET) BY MEANS OFPOLYMERASE CHAIN REACTION-RESTRICTION FRAGMENT LENGTH POLYMORPHISM (PCR-RFLP)TECHNIQUE

WINDA CAHYANINGTYAS, Tri Joko Raharjo

2012 | Skripsi | Program Studi S1 Kimia

Identifikasi cemaranbabidalam panganolahan berbasis uji DNA merupakan metode yang valid karena sifat DNA spesifikuntuksetiapspesies. Penelitian ini bertujuan mengembangkan metode uji cemaran babi pada produk panganolahan (nuget) dengan menggunakan teknikPCR-RFLP sehingga dapat digunakan sebagai metode uji untuk sertifikasi halal. Penelitian dimulaidenganisolasi DNA mitokondria darisampelnuget,dilanjutkanamplifikasi PCR fragmengen cytbdengan primer cytb1(5’-CCATCCAACATCTCAGCATGATGAAA-3’) dan primer cytb2 (5’- GCCCCTCAGAATGATATTTGTCCTCA-3’). Fragmen hasil PCR kemudian digunakan untuk analisis RFLP dengancaradipotongmenggunakanenzim BamHI dan BseDIdandianalisisdenganelektroforesis. Validasi metode yang dilakukanmeliputi uji spesifisitasdan penentuan limit deteksi dari metode yang digunakan. Metodetervalidasi digunakanuntukmenguji nuget komersial yang beredar di Yogyakarta. Hasil amplifikasi PCR gen cytbisolatmtDNAsampelnugetberupafragmen DNA berukuran 359 pb. Hasiluji RFLP terhadapfragmenhasil PCR pada sampel nuget yang tidak terkontaminasi babidengan menggunakanenzim BamHI tidak menunjukkan pemotongan, sedangkan pada nuget yang terkontaminasi babidihasikan fragmen berukuran 244 dan 115 pb. Proses digesti dengan enzim BseDI menghasilkan fragmen berukuran 331 dan 28 pb untuk sampel nugetyang bebas kontaminasi daging babi dan fragmenberukuran228 dan 131 pb untuk sampel nuget yang terkontaminasi daging babi. HasilinimenunjukkanteknikPCRRFLP mampumembedakan sampel nuget yang terkontaminasi daging babi dengannugetbebaskontaminasi daging babi.Batas minimum konsentrasi yang dapat dideteksi oleh teknik PCR-RFLP adalah sampai pada konsentrasi5%. Hasilanalisis terhadap delapan sampel nuget komersial menunjukkantidak ada sampel nuget yangyangterkontaminasi babi

Kata Kunci : nuget, validasi, kontaminasi, babi, PCR-RFLP