DETEKSI GEN mecA ISOLAT Staphylococcus aureus RESISTEN dan SENSITIF TERHADAP METISILIN ASAL SUSU SAPI PERAH

PINANDITYA, Fx. Satria , Agnesia Endang Tri Hastuti Wahyuni

2014 | Tesis |

Staphylococcus aureus merupakan bakteri utama penyebab mastitis klinis maupun subklinis pada sapi perah. Pengobatan mastitis sampai sekarang masih menggunakan antibiotik, sementara penggunaan antibiotik yang tidak tepat menyebabkan resistensi S. aureus terhadap antibiotik. Methicillin resistant staphylococcus aureus (MRSA) merupakan salah satu strain S. aureus yang resisten terhadap antibiotik metisilin. Pertama kali, MRSA terdeteksi pada susu sapi mastitis dan merupakan bakteri patogen pada manusia. Gen mecA merupakan gen yang bertanggungjawab terhadap resistensi antibiotik beta-laktam seperti metisilin, namun dilaporkan juga mecA ditemukan pada S. aureus yang sensitif terhadap metisilin. Tujuan dari penelitian ini adalah mendeteksi keberadaan gen mecA pada isolat S. aureus resisten dan sensitif terhadap metisilin yang berasal dari susu sapi perah. Sebanyak 32 isolat S. aureus resisten dan sensitif terhadap metisilin asal susu sapi perah di Boyolali, Pacitan, dan Ponorogo dideteksi keberadaan gen mecA. Dari 32 isolat S. aureus, sebanyak 28 isolat berasal dari susu mastitis subklinis, 3 isolat berasal dari susu normal, dan 1 isolat berasal dari susu mastitis klinis. Identifikasi ulang S. aureus dilakukan dengan mengkultur pada media plat agar darah (PAD), pengecatan Gram, uji katalase, uji koagulase, kemampuan fermentasi manitol dengan Mannitol Salt Agar (MSA), dan uji voges proskauer. Identifikasi S. aureus secara molekuler dilakukan dengan deteksi gen 23S rRNA menggunakan Polymerase Chain Reaction (PCR). Selanjutnya, dilakukan penentuan S. aureus resisten dan sensitif dengan menguji bakteri pada Mueller- Hinton Agar (MHA) menggunakan disk metisilin. Deteksi molekuler Polymerase Chain Reaction (PCR) untuk mengidentifikasi gen mecA sebagai gen target. Produk PCR gen mecA kemudian disekuensing untuk memastikan bahwa fragmen DNA yang teramplifikasi merupakan gen mecA atau tidak. Hasil penelitian menunjukkan bahwa seluruh isolat (100%) S. aureus dapat diidentifikasi baik secara konvensional maupun molekuler. Staphylococcus aureus yang resisten maupun sensitif terhadap metisilin masing-masing 16 (50%) isolat. Gen mecA tidak terdeteksi pada semua isolat S. aureus baik yang resisten maupun sensitif terhadap metisilin. Persentase MRSA sebanyak 93,75% ditemukan pada susu mastitis subklinis.

Staphylococcus aureus is the main cause for clinical and subclinical mastitis in dairy cattle. Until recently, mastitis has only been medicated with antibiotics, despite the fact that misuse of antibiotics can cause S. aureus resistance from antibiotics. Methicillin resistant staphylococcus aureus (MRSA) is one of the strains of S. aureus which is resistant to methicillin. MRSA was detected for the first time in cattle milk with mastitis and it was a pathogenic bacterium to humans. While mecA gene is responsible for the resistance from beta-lactam antibiotics such as methicillin, it was also reported to be found in methicillin sensitive S. aureus. The objective of this research is to detect the existence of mecA gene in methicillin resistant and sensitive S. aureus which are isolated from dairy cattle milk. MecA gene were detected from 32 methicillin resistant and sensitive S. aureus isolate from cattle milk from Boyolali, Pacitan, and Ponorogo. In those 32 S. aureus isolate, 28 are from subclinical mastitis cattle milk, 3 from normal cattle milk, and 1 from clinical mastitis milk. Reidentification of S. aureus was done by culture process on blood agar plate, gram stain, catalase test, coagulase test, mannitol fermentation ability with Mannitol Salt Agar (MSA), and voges proskauer test. Identification of S. aureus in a molecular level was done by detecting 23S rRNA gene using polymerase chain reaction (PCR). The determination of resistant and sensitive S. aureus by testing the bacterium on Mueller-Hinton Agar (MHA) using methicillin disc was done subsequently. PCR molecular detection was used to identify mecA gene as the target gene. PCR product of mecA gene was then sequenced to determine whether the amplified DNA fragment was actually mecA gene or not. The result of this research showed that all of the S. aureus isolates (100%) could be indentified conventionally as well as molecularly. 16 (50%) methicillin resistant and 16 (50%) methicillin sensitive were identified from the S. aureus isolates. MecA gene cannot be identified in all of the S. aureus isolates, both methicillin resistant and sensitive. 93.75% MRSA were found in the subclinical mastitis milk.

Kata Kunci : Staphylococcus aureus, MRSA, methicillin, mecA gene