BIOKONJUGASI ANTIBODI ANTI-EPCAM PADA NANOPARTIKEL RIBOSOME INACTIVATING PROTEIN Mirabilis jalapa L.-C (RIP MJ-C) TERENKAPSULASI GANDA KITOSAN-ALGINAT DENGAN KATALIS EDAC

AIDA FATHIA, Prof. Dr. Sismindari, SU., Apt.

2018 | Skripsi | S1 FARMASI

Fraksi negatif RIP (Ribosome Inactivating Protein) dari daun Mirabilis jalapa L. yang disebut RIP MJ-C telah terbukti bersifat sitotoksik terhadap beberapa lini sel kanker. Nanopartikel memungkinkan modifikasi efektifitas dan selektifitas sistem penghantaran obat melalui konjugasi senyawa penarget spesifik. Konjugasi antibodi anti-EpCAM diperkirakan dapat memfasilitasi penghantaran partikel obat secara spesifik menuju sel kanker. RIP MJ-C diformulasikan dalam bentuk nanopartikel terenkapsulasi ganda menggunakan polimer kitosan dan alginat serta crosslinker Na-TPP dan CaCl2. Optimasi pH reaksi biokonjugasi dilakukan antara antibodi anti-EpCAM dengan nanopartikel RIP MJ-C. Variasi pH yang digunakan adalah 4,5; 5,5; dan 6,5. Keberhasilan reaksi konjugasi dianalisis secara kualitatif melalui metode elektroforesis menggunakan Native-PAGE dan secara kuantitatif menggunakan Bicinchoninic Acid (BCA) assay serta menggunakan Particle Size Analyzer (PSA) untuk melihat peningkatan ukuran nanopartikel yang berhasil terkonjugasi. Analisis kualitatif dan kuantitatif hasil optimasi pH medium biokonjugasi antibodi anti-EpCAM dengan nanopartikel RIP MJ-C menunjukkan reaksi biokonjugasi berjalan optimal pada pH medium 5,5. Nanopartikel RIP MJ-C terkonjugasi anti-EpCAM memiliki diameter rata-rata 513,5 nm. Elektroforesis Native-PAGE menunjukkan terjadinya penurunan intensitas pita antibodi antiEpCAM pada nanopartikel terkonjugasi dibandingkan dengan kontrol antiEpCAM dan BCA assay menunjukkan efisiensi konjugasi sebesar 64,01 ����¯�¿�½������± 0,67%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa katalis EDAC dalam pH 5,5 mampu mengkonjugasikan anti-EpCAM pada nanopartikel RIP MJ-C. Kata kunci : RIP MJ-C, Enkapsulasi Ganda, anti-EpCAM, EDAC

The negative fraction of RIP (Ribosome Inactivating Protein) from Mirabilis jalapa L. leaf called RIP MJ-C has been shown to be cytotoxic to some cancer cell lines. Nanoparticles allow for the modification of effectiveness and selectivity of drug delivery systems through the conjugation of specific targeting compounds. Anti-EpCAM antibody conjugation is expected to facilitate delivery of specific drug particles to cancer cells. RIP MJ-C is formulated in the form of a double encapsulated nanoparticle using chitosan and alginate polymers as well as a Na-TPP and CaCl2 crosslinker. Optimization of pH of the bioconjugation reaction was performed between antiEpCAM antibodies with RIP MJ-C nanoparticles. The pH variation used was 4.5; 5.5; and 6.5. The success of the conjugate reaction was qualitatively analyzed by electrophoresis method using Native-PAGE and quantitatively using Bicinchoninic Acid (BCA) assay and using Particle Size Analyzer (PSA) to see the increasing size of conjugated nanoparticles. Qualitative and quantitative analyzes of optimum pH of bioconjugated anti-EpCAM antibody with RIP MJ-C nanoparticles showed optimum bioconjugation reaction at medium pH 5.5. RIP MJ-C conjugated anti-EpCAM RIP has an average diameter of 513.5 nm. Native-PAGE electrophoresis showed a decrease in the intensity of anti-EpCAM antibody bands in conjugated nanoparticles compared with the anti-EpCAM control and BCA assay showed a conjugation efficiency of 64.01 ����¯�¿�½������± 0.67%. The results showed that EDAC catalysts in pH 5.5 were able to conjugate anti-EpCAM on RIP MJ-C nanoparticles. Keywords : RIP MJ-C, Double Encapsulated, Anti-EpCAM, EDAC

Kata Kunci : RIP MJ-C, Enkapsulasi Ganda, anti-EpCAM, EDAC