KAITAN HIPERMETILASI PROMOTER GEN RASSF1A DAN CDKN2A TERHADAP KEBIASAAN MEROKOK PADA PASIEN KARSINOMA NASOFARING

ERIKA DIANA RISANTI, Jajah Fachiroh S.P., M.Si., PhD.; r. Ery Kus Dwianingsih, Sp.PA, PhD.

2017 | Tesis | S2 Ilmu Kedokteran Dasar dan Biomedis

Latar Belakang. Hipermetilasi DNA gen penekan tumor merupakan salah satu faktor epigenetik yang mendasari perkembangan Karsinoma Nasofaring (KNF). Rokok sebagai faktor risiko KNF diduga menyebabkan terjadinya metilasi DNA. Hipermetilasi promoter gen RASSF1A dan CDKN2A pada KNF diduga berhubungan dengan kebiasaan merokok. Pemeriksaan metilasi DNA pada darah tepi (leukosit) penting dilakukan untuk melihat perbedaannya dengan jaringan tumor. Tujuan. Tujuan penelitian ini adalah untuk melihat perbedaan pola metilasi DNA gen RASSF1A dan CDKN2A di darah tepi dan jaringan. Tujuan yang lain yaitu untuk melihat hubungan kebiasaan merokok dengan terjadinya hipermetilasi gen RASSF1A dan CDKN2A. Metode. Penelitian ini melibatkan pasien KNF yang terdiri dari 19 subyek kelompok kasus (perokok) dan 20 subyek kelompok kontrol (bukan perokok). DNA dari masing-masing subyek diambil dari dua sumber yaitu jaringan FFPE (Formalin-Fixed Paraffin Embeded) dan darah (buffycoat). Modifikasi bisulfit menggunakan DNA sejumlah 500 ng. Metode yang digunakan untuk deteksi metilasi adalah MS-PCR (Methylation-Specific PCR). Hubungan antara kedua variabel dianalisis menggunakan Chi Square. Hasil. Hasil MS-PCR gen RASSF1A pada jaringan hanya dapat diamati pada 4 sampel saja (21,05%) sedangkan MS-PCR gen CDKN2A tidak menampakkan hasil. Hasil MS-PCR gen RASSF1A pada darah menunjukkan 68,42% pasien KNF perokok mengalami metilasi dan 75% pasien KNF bukan perokok mengalami metilasi. Hasil MS-PCR gen CKDN2A menunjukkan 21,05% pasien KNF perokok mengalami metilasi dan 25% pasien KNF bukan perokok mengalami metilasi. Kesimpulan. Perbedaan pola metilasi antara jaringan dan darah pada pasien KNF tidak dapat ditarik kesimpulan. Kebiasaan merokok tidak berhubungan dengan metilasi gen RASSF1A dan CDKN2A pada darah tepi pasien KNF (p > 0,05).

Backgorund. Promoter hypermethylation of tumor suppressor genes is one of the factor in Nasopharyngeal Carcinoma (NPC) pathogenesis. Smoking as the risk factor of NPC may cause DNA hypermethylation. RASSF1A and CDKN2A promoter hypermethylation assumed to correlates with smoking behaviour. Study to distinguish DNA methylation in peripheral blood (leucocyte) and tumour tissue is necessary. Objective. The aim of this study is to know the differences of DNA methylation pattern of RASSF1A and CDKN2A in peripheral blood and tumour tissue. Moreover, to investigate the association between smoking behaviour and DNA methylation in RASSF1A and CDKN2A genes. Methods. This study was involved NPCs patients which consists of 19 subjects of smokers group and 20 subject of non-smokers group. DNA from each subject was extracted from FFPE (Formalin-Fixed Paraffin Embeded) tissue and blood (buffycoat). Bisulfite modification was used 500 ng of DNA. Methylation status was determined by MSP (Methylation-Specific PCR). The association between both variables was analyzedwith Chi-Square. Results. MS-PCR of RASSF1A gene from tissue sample was only detected in 4 samples while MS-PCR of CDKN2A gene was not detected in any tissue samples. MS-PCR of RASSF1A gene from blood showed 68,42% smokers of NPCs patients had methylation and 75% non-smokers had methylation. MS-PCR of CDKN2A gene from blood showed 21,05% had methylation and 25% nonsmokers had methylation. Conclusions. The differences of methylation status between tissue and blood in NPCs patients was not concluded. Smoking behaviour was not associated with methylation status of RASSF1A and CDKN2A genes in peripheral blood among NPCs patients (p > 0,05).

Kata Kunci : Hipermetilasi DNA, RASSF1A, CDKN2A, kebiasaan merokok, KNF, DNA hypermethylation, RASSF1A, CDKN2A, smoking habit, NPC