PENGARUH FRAKSI ETANOLIK BEKATUL BERAS HITAM (Oryza sativa L.) TORAJA TERHADAP AKTIVITAS SITOTOKSIK DAN EKSPRESI CASPASE 3 PADA SEL KANKER USUS BESAR WiDr

MEGA AYU OKTAVINA, Dra. Rarastoeti Pratiwi, M.Sc., Ph.D; Dr. Rumiyati, M.Si., Apt

2017 | Tesis | S2 Biologi

Beras hitam banyak mengandung antosianin yang mampu menghambat pertumbuhan sel kanker. Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari pengaruh fraksi aktif bekatul beras hitam kultigar Toraja terhadap sel kanker usus besar WiDr. Beras hitam diekstraksi secara maserasi dengan ethanol-HCl. Ekstrak dipisahkan menjadi beberapa kelompok senyawa yang disebut fraksi dengan metode KLTP dengan solven butanol : asam asetat : air (4:1:5). Uji sitotoksik ekstrak dan fraksi dilakukan dengan metode MTT Assay. Fraksi aktif digunakan untuk pengujian selanjutnya meliputi uji antiproliferasi dengan metode doubling time, induksi apoptosis dan pengamatan siklus sel dengan flowcytometri dan deteksi ekspresi protein Caspase-3 dengan Western Blott. Deteksi kandungan Cyanidin-3-glucoside dan Pheonidin-3-glucoside pada ekstrak maupun fraksi aktif dilakukan dengan metode HPLC. Data dianalisis secara diskriptif untuk membandingkan antara kontrol dan perlakuan. Hasil penelitian menunjukan bahwa ekstrak bekatul memiliki IC50 1500,77 ± 2,284µg/ml. Hasil pemisahan ekstrak menunjukan bahwa ekstrak terdiri dari 6 fraksi. Fraksi 6 merupakan fraksi teraktif dengan IC50 552,45±1,32µg/ml. Fraksi aktif mampu menghambat proliferasi sel dengan menginduksi terjadinya apoptosis (17,455±0,53 %) dan menghambat siklus sel di fase G2/M. Ekspresi Caspase 3 aktif tidak terdeteksi baik pada kontrol maupun sel yang diberi fraksi aktif. Ekstrak dan fraksi aktif terdeteksi mengandung Cyanidin-3-glucoside sebesar 26,84 dan 2,78 ppm namun tidak terdeteksi mengandung Pheonidin-3-glucoside.

Black rice which contains rich anthocyanin able to inhibit the growth of cancer cells. This study investigated an inhibitory effect of the black rice cv Toraja active fraction on human colon cancer WiDr cell growth. Black rice bran was extracted with ethanol-HCl. The extract fractions were separated by preparative TLC. The cytotoxicity of black rice bran extract and fractions were tested by MTT Assay. The active fraction was evaluated for cell proliferation effect by doubling time method. Apoptosis induction and cell cycle arrest were measured by flow cytometry methods. Procaspase 3 and caspase 3 expressions were detected by Western Blott. Cyanidin-3-glucoside-3-glucoside in black rice bran extract and fraction was detected by HPLC. Results showed that fraction 6 (F6) was more toxic (IC50 value 552.45 ±1.32 µg/ml) than the extract (IC50 value 1500.77±2.284 µg/ml). This active fraction showed WiDr cell proliferation inhibition. Further, active fraction F6 could induced cell apoptosis (17.45±0.53%) and promoted G2/M cell cycle arrest. However, only procaspase 3 was detected in cells control. Cyanidin-3-glucoside was determined both in extract (26,84 ppm) and the active fraction (2,78ppm). Therefore, the active fraction 6 of the black rice cv Toraja bran containing Cyanidin-3-glucoside inhibits the growth of human colon cancer WiDr cells.

Kata Kunci : Cyanidin-3-glucoside, cytotoxicity, ethanolic extract,black rice cv Toraja, WiDr cells