EFEK KOMBINASI EKSTRAK TERPURIFIKASI Andrographis paniculata Burm.F Ness DAN EKSTRAK TERPURIFIKASI Centella asiatica L. Urban TERHADAP EKSPRESI PPAR GAMMA DAN GLUT4 PADA SEL 3T3 L1 ADIPOSIT

LA ODE MUH. FITRAWAN, Prof. Dr. Agung Endro Nugroho, M.Si., Apt.; Prof. Dr. Suwidjiyo Pramono, DEA., Apt.

2017 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Penggunaan herba sambiloto (Andrographis paniculata Burm.F. Ness) dan herba pegagan (Centela asiatica L. Urban) dilaporkan dapat memperbaiki kondisi resistensi insulin pada diabetes melitus. Namun, mekanisme aksi pada tingkat molekuler dalam menurunkan kadar glukosa darah belum diketahui apabila kedua tanaman tersebut dikombinasikan. Penelitian ini bertujuan untuk menguji potensi dan efek kombinasi ekstrak terpurifikasi herba sambiloto (ETHS) dan pegagan (ETHP) pada sel 3T3 L1 adiposit resistensi insulin terhadap uptake glukosa dan ekspresi PPAR gamma dan GLUT4 pada tingkat mRNA dibandingkan dengan obat pioglitazon dari golongan tiazolidinedion maupun masing-masing ekstrak. ETHS dan ETHP ditentukan kadarnya dengan kromatografi lapis tipisdensitometri. Toksisitas kedua ekstrak diujikan terhadap sel 3T3 L1. LC50 ditentukan dengan analisis probit. Differensiasi sel adiposit menggunakan insulin, dexametason dan IBMX dari sel 3T3 L1. Induksi resistensi insulin pada sel adiposit menggunakan glukosa 55 milimolar dan insulin 100 nanomolar selama 10 hari. Aktivitas uptake glukosa dan ekspresi PPAR gamma dan GLUT4 diujikan terhadap kelompok pioglitazon, ETHS, ETHP dan kombinasi ekstrak konvensional. Data yang diperoleh dianalisis secara statistik menggunakan unpaired t test atau uji ANOVA oneway atau Man Whitney. Kadar andrografolid dan asiatikosid dalam ETHS dan ETHP masing-masing sebesar 17,41 plus minus 0,42 persen dan 11,34 plus minus 0,69 persen. Nilai LC50 ETHS dan ETHP terhadap sel 3T3 L1 masing-masing sebesar 72,71 mikrogram per mililiter dan 46,29 mikrogram per mililiter. Pengujian kombinasi ekstrak terpurifikasi (30:10) ���¼g/ml terhadap sel tidak menunjukan toksisitas sel. Differensiasi sel adiposit pada hari 10 menunjukan bentuk, ukuran dan droplet lipid yang lebih besar, akumulasi lipd meningkat 4,8 kali atau berbeda signifikan dengan preadiposit (p kurang dari 0,05), dan regulasi ekspresi PPAR gamma berbeda signifikan dibanding sel preadiposit (p kurang dari 0,05). Hasil uji resistensi insulin dengan analisis eskpresi GLUT4 menunjukan perbedaan signifikan dibandingkan sel adiposit normal (p kurang dari 0,05). Analisis ANOVA oneway, aktivitas uptake glukosa kelompok kombinasi ekstrak terpurifikasi konsentrasi (30:10) ���¼g/ml berbeda signifikan dengan kontrol negatif (DMSO). Kombinasi ekstrak terpurifikasi konsentrasi (30:10) mikrogram per mililiter menunjukan peningkatan regulasi terhadap ekspresi PPAR gamma dan GLUT4 pada tingkat mRNA yang signifikan dibandingkan kontrol negatif dan tidak berbeda signifikan (p lebih dari 0,05) ketika dibandingkan dengan pioglitazone 0,02 mikromolar dan masing-masing ekstrak terpurifikasi.

The use of the sambiloto herb (Andrographis paniculata Burm F. Ness) and Centella asiatica L. Urban herb are reported can improve the insulin resistance and type 2 diabetes mellitus. However, the molecular mechanisms of those combined plants in lowering blood glucose are unknown. The object of this study was to examine the toxicities and effects of sambiloto herb purified extracts (SHPE) and pegagan herb purified extracts (PHPE) combined on glucose uptake, PPAR gamma, and GLUT4 expression at mRNA level of insulin resistance 3T3 L1 adipocyte cells. Levels of andrographolid and asiaticoside in SHPE and PHPE were measured with densitometric Thin Layer Chromatography Densitometry. The toxicity of both extracts was tested on 3T3 L1 cells. LC50 was determined by probit analysis. The adipocyte cells were differentiated by using insulin, dexamethasone and IBMX from 3T3 L1 cells. Induction of insulin resistance in adipocyte cells by using glucose 55 milimolar and insulin 100 nanomolar for 10 days. Pioglitazone, ETHS, ETHP and the extracts combination were tested on glucose uptake activity and PPAR gamma and GLUT4 expression. The obtained data were analyzed statistically by using unpaired t test or ANOVA oneway or Mann Whitney test. The andrographolid levels in SHPE were 17.41 plus minus 0.42 percent and asiatikosid levels in PHPE were 11.34 plus minus 0.69 percent. The LC50 of SHPE and PHPE on 3T3 L1 cells were 72.71 microgram per mililiter and 46.29 microgram per mililiter. The purified extracts combination (30:10) microgram per mililiter did not show cell toxicity. By the 10 days , the adipocyte cells had larger in form, size, lipid droplet, and increased lipid accumulation was 4.8 fold greater than preadipocytes with significantly different (p less than 0.05), and PPAR gamma expressions were signicantly different to preadipocyte cells. Results of insulin resistance test with GLUT4 expression analysis had significant differences (p less than 0.05) compared to normal adipocyte cells. The glucose uptake of the extract combination (30:10) microgram per mililiter was signicantly different to negative control (DMSO) at 180 minutes. The combination of the purified extracts (30:10) microgram per mililiter showed an increasing in regulation of PPAR gamma and GLUT4 expression at mRNA levels significantly relative to negative control, and has not significant difference (p more than 0,05) compared to pioglitazone 0.02 micromolar and each purified single extract.

Kata Kunci : sambiloto, pegagan, ekstrak terpurifikasi, sel 3T3 L1, PPAR gamma, GLUT4