OPTIMASI pH DAN SUHU UNTUK MEMPRODUKSI N-ASETILGLUKOSAMIN DENGAN KITINASE KASAR Serratia marcescens PT6

HENDRI SETIAWAN, Indun Dewi Puspita, S.P., M.Sc. Ph.D.; Dr. Ir. Murwantoko, M.Si.

2017 | Skripsi | S1 TEKNOLOGI HASIL PERIKANAN

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui cara produksi kitinase dari Serratia marcescens PT6 dan purifikasi parsial menggunakan presipitasi amonium sulfat serta dialisis, mengetahui pH dan suhu optimal kitinase kasar S. marcescens PT6, mengetahui waktu optimal produksi N-asetilglukosamin (NAG) secara enzimatis dengan kitinase kasar S. marcescens PT6, dan menganalisis NAG pada produk hasil hidrolisis kitin dan rendemennya. Produksi kitinase dilakukan melalui fermentasi cair menggunakan medium kitin cair dengan penambahan yeast extract (0,015 persen) dan pati (1,5 persen) pada pH 7, suhu 30 derajat Celcius, dan kecepatan agitasi 100 rpm. Proses fermentasi dilakukan selama 5 hari dengan jumlah inokulum awal sebanyak 0,5 persen dan dilakukan pengamatan setiap 24 jam. Purifikasi parsial dilakukan dengan presipitasi amonium sulfat pada berbagai tingkat kejenuhan dan dialisis untuk memisahkan kitinase dengan komponen lain. Kitinase kasar hasil purifikasi parsial kemudian dioptimasi pada berbagai pH dan suhu reaksi. Kondisi pH dan suhu optimal digunakan untuk produksi NAG pada berbagai waktu reaksi kemudian produk hidrolisis kitin dianalisis menggunakan Thin Layer Chromatography (TLC) dan High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Hasil penelitian menunjukkan bahwa waktu optimal produksi kitinase dicapai selama 3 hari inkubasi. Purifikasi parsial dengan presipitasi amonium sulfat pada tingkat kejenuhan 60 persen dan dialisis diperoleh aktivitas spesifik kitinase sebesar 0,0423 U/mg dengan purification fold 1,62. Nilai pH 6 dan suhu 45 derajat Celcius merupakan kondisi optimal reaksi kitinase kasar S. marcescens. Waktu reaksi hidrolisis selama 120 menit menghasilkan jumlah NAG tertinggi. Analisis TLC dan HPLC menunjukkan bahwa produk hidrolisis dominan yang dihasilkan merupakan NAG dengan rendemen sebesar 8,30 persen.

The research aimed to know the production of chitinase from Serratia marcescens PT6 and partial purification using ammonium sulphate precipitation and dyalisis, to determine the optimal pH and temperature of crude chitinase from S. marcescens PT6, to determine the optimal time of enzymatic reaction to produce N-acetylglucosamine (NAG) using crude chitinase from S. marcescens PT6, and to analyze the NAG content in hydrolized chitin product and its yield. Chitinase was produced by fermentation of S. marcescens PT6 in chitin medium added with yeast extract (0,015 percent) and starch (1,5 percent). The condition of pH 6, temperature 30 Celcius degree and agitation speed 100 rpm were maintained for 5 days during fermentation. Partial purification of chitinase was carried out by partial precipitation with ammonium sulphate and dialysis to separate the chitinase from other components. Precipitated crude chitinase was optimized in various pH and temperature of reaction. Optimal pH and temperature conditions was used to produce NAG at various time reaction and NAG was analyzed using Thin Layer Chromatography (TLC) and High Performance Liquid Chromatography (HPLC). The result showed that the optimal chitinase production was obtained in 3 days of incubation. The crude chitinase obtained from partial purification by ammonium sulphate precipitation (60 percent) and dialysis showed a specific activity of 0,0423 U/mg with purification fold of 1,62. The optimal reaction condition for crude chitinase from S. marcescens PT6 was pH 6 and temperature 45 Celcius degree. The highest amount of NAG was achieved at 120 minutes of enzymatic reaction. TLC and HPLC analysis showed that the dominant hydrolized product generated from enzymatic reaction was NAG with a yield of 8.30 percent.

Kata Kunci : kitinase, N-asetilglukosamin, optimasi, purifikasi, Serratia marcescens PT6, chitinase, N-acetylglucosamin, optimation, purification, Serratia marcescens PT 6