DETEKSI DAN TRANSKRIPSI HOMOLOG GEN PENSINTESIS CONJUGATED LINOLEIC ACID (CLA) PADA Lactobacillus casei STRAIN ASAL SALURAN PENCERNAAN

ARI SURYA SUKARNO, Widodo, S.P., M. Sc., Ph. D ; Dr. Ir. Donny Widianto

2016 | Tesis | S2 Bioteknologi

Conjugated linoleic acid (CLA) merupakan senyawa bioaktif yang dapat disintesis oleh probiotik. Lactobacillus casei strain AP dan AG adalah strain hasil isolasi dari saluran pencernaan bayi yang berpotensi sebagai probiotik. Penelitian ini bertujuan untuk mendeteksi gen pensintesis CLA dan transkripsi gen tersebut pada Lactobacillus casei strain AP dan AG dengan penambahan asam linoleat. Deteksi gen pada Lactobacillus casei strain AP dan AG dilakukan dengan mengamplifikasi parsial, pada lokasi yang bersifat homolog terhadap gen cla-hy, cla-dh, dan cla-dc dari Lactobacillus plantarum AKU1009a. Selanjutnya, Kultur ditumbuhkan dalam media tanpa dan mengandung asam linoleat (0,4 mg/ml). Transkripsi ketiga homolog gen cla-hy, cla-dh, dan cla-dc dianalisis menggunakan metode quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction (qRT-PCR) untuk mengetahui apakah transkripsi gen bersifat konstitutif atau indusibel. Hasil amplifikasi dari genom L. casei strain AG diperoleh tiga parsial sekuen secara berurutan dengan panjang 143, 206, dan 148 bp dan memilki homologi dengan gen cla-hy, cla-dh, dan cla-dc. Amplifikasi pada L. casei strain AP menggunakan primer yang sama, tidak menghasilkan produk PCR. Transkripsi parsial gen homolog cla-hy, cla-dh, dan cla-dc pada kultur L. casei strain AG dalam media asam linoleat secara berurutan 0,74; 0,69; dan 1,43 kali lipat dibandingkan tanpa penambahan asam linoleat. Analisis statistik transkripsi ketiga gen tersebut tidak menunjukkan perbedaan signifikan dengan penambahan asam linoleat (P>0,05). Transkripsi parsial homolog gen cla-hy, cla-dh, dan cla-dc pada L. casei strain AG bersifat tidak teriduksi oleh penambahan asam linoleat 0,4 mg/ml.

Conjugated linoelic acid (CLA) is bioactive compound that can be synthesized by probiotic. Lactobacillus casei strain AP and AG were isolated from Indonesian infant and had a potential as probiotic culture. The objectives of this study was to detect and measure level transcription of the genes responsible for CLA synthesis in Lactobacillus casei AP and AG. The gene detection was performed by amplification parsial genom in conserve location of cla-hy, cla-dh, and cla-dc genes from Lactobacillus plantarum AKU1009a. Bacterial cultur was grown in media with and without addition of linoleic acid (0.4 mg/ml). The transcription of cla-hy, cla-dh, and cla-dc homolog genes were analyzed by quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction (qRT-PCR). Amplification product of parsial genom in L. casei strain AG was 143, 206, and 148 bp respectively. These sequences were identified as parsial cla-hy, cla-dh, and cla-dc homolog genes. The same primer did not amplify cla-hy, cla-dh, and cla-dc genes in L. casei strain AP. Level of transcription cla-hy, cla-dh, and cla-dc homolog gene in L. casei strain AG grown in media containing linoleic acid 0.4 mg/ was 0.74; 0.69; and 1.43 fold change resepectively, and this was not significant (P>0.05). The transcription of cla-hy, cla-dh, and cla-dc homolog genes in L. casei strain AG was not induction by addition of linoleic acid at 0.4 mg/ml.

Kata Kunci : Lactobacillus casei, asam linoleat, gen cla dan transkripsi