EKPRESI MICRORNA 451 (miR 451) DAN P-GLYCOPROTEIN (P-GP) PADA RAJI CELL LINE RESISTEN DOXORUBICIN

NIHAYATUS SAADAH, Prof. dr. Sofia Mubarika Haryana, M.Med.Sc, Ph.D.

2015 | Tesis | S2 Ilmu Kedokteran Dasar dan Biomedis

Adanya overekspresi P-glycoprotein (P-gp) yang dikode oleh gen MDR-1 menjadi salah satu penyebab resistensi terhadap kemoterapi. MicroRNA, RNA kecil 18- 22 nukleotida, diketahui memainkan peran penting dalam regulasi ekspresi pada tingkat fisiologi maupun patologi. Beberapa sel-sel kanker yang resisten memperlihatkan adanya over-ekspresi P-gp yang dipengaruhi oleh disregulasi microRNA-451 yang menyebabkan peningkatan aktifasi faktor transkripsi gen MDR1. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui ekspresi microRNA-451 dan P-glycoprotein pada sel Raji yang resisten terhadap doxorubicin. Dua kelompok sel Raji digunakan dalam penelitian ini yaitu sel Raji (Sensitif) dan sel Raji/Dox (Resisten). Sel dikulturkan pada media komplit RPMI 1640 tanpa doxorubicin, diinkubasi pada 37oC dengan 5% CO2. Aktivitas sitotoksis doxorubicin diuji dengan uji MTT. Efek doxorubicin terhadap ekpresi P-glycoprotein (P-gp) dianalisis dengan metode immunositokimiawi. Ekpresi microRNA-451 (miR-451) dianalisis dengan quantitive Real Time-PCR (qRT-PCR). Uji MTT menunjukkan sel Raji/Dox memiliki nilai IC50 dua kali lebih besar dibandingkan sel Raji parentalnya, yaitu 8,82 μg/mL untuk sel Raji Parental dan 17,15 μg/mL untuk sel Raji/Dox. Ekspresi P-gp tidak ditemukan pada sel Raji Parental akan tetapi ditemukan pada sel Raji/Dox. Terdapat peningkatan ekspresi P-gp pada sel Raji/Dox sebesar 21% dibandingkan sel Raji (0%). Hasil quantitative Real Time-PCR (qRT-PCR) memperlihatkan microRNA-451 tidak terekspresi baik pada sel Raji Parental maupun sel Raji/Dox. Disimpulkan bahwa doxorubicin dapat menginduksi resistensi kemoterapi dan peningkatan ekspresi P-gp. Penelia ini memperlihatkan adanya korelasi antara nilai IC50 dan ekspresi P-gp pada sel Raji/Dox. Over-ekspresi P-gp pada penelitian ini mungkin dikarenakan oleh induksi doxorubicin bukan karena penurunan ekspresi microRNA-451.

Over-expression of drug efflux transporters protein, P-glycoprotein encoded by MDR1 gene, is known as one of the major causes resistance to chemotherapy. Previous study in breast cancer resistance cells showed that over-expression of P-glycoprotein is influenced by microRNA-451, small RNAs 18-22 nucleotides, by targeting mRNA MDR1. In this study we want to know microRNA-451 and P-glycoprotein expression on doxorubicin resistance Raji cell line. Subjects in this study were two type of Raji cell line, Raji Parental and Raji/Dox Raji cells. Cells cultured in complete media RPMI 1640 without doxorubicin treatment, incubated at 37oC in a 5% CO2 athmospere. Doxorubicin activity was detected with MTT assay. The expression level of P-Glycoprotein was estimated using immunocytochemistry (ICC) method and photographed ten horizons of each cell smear (at least 20 cells). MicroRNA-451 expression was estimated using quantitative real time-PCR. IC50 value for Raji/Dox cells was 17.151686 μg/mL and Raji Parental cells was 8.824092 μg/mL. Expression of P-glycoprotein was not found in Raji Parental cells, but it was found on cytoplasmic and cytoplasmic membrane of some Raji/Dox cells (21% from total cells were counted). Present study showed that microRNA-451 was not expressed in both Raji Parental and Raji/Dox cells. Doxorubicin could induce resistance to chemoteraphy and enhance P-glycoprotein expression level. It was showed a correlation between IC50 value and P-glycoprotein expression in Raji/Dox cells. Over-expression of P-glycoprotein in present study might be caused by doxorubicin induction not influenced by the loss of microRNA-451.

Kata Kunci : Doxorubicin, microRNA 451, P-glycoprotein, Resisten, sel Raji