Laporkan Masalah

Ekspresi Gen IL-6, TNF- alfa, Bcl-2, p16 dan Gambaran Histologi Lien Tikus Sprague-Dawley yang Diinduksi Trimethyltin

PUTRI UTAMI, Jajah Fachiroh, S.P., M.Si., Ph.D; Dewi Kartikawati Paramita, S.Si, M.Si, Ph.D

2022 | Tesis | MAGISTER ILMU BIOMEDIK

Latar Belakang. Penuaan pada sistem imun atau immunosenescence dikarakterisasi sebagai sel yang mengalami pengehentian siklus sel secara permanen disertai sekresi senescence-associated secretory phenotype (SASP) berupa sitokin proinflamasi. Immunosenescence secara tidak langsung dapat menyebabkan perubahan struktur pada organa lymphoidea. Penelitian terkait senescence pada hewan coba menggunakan induksi bahan kimiawi pemicu penuaan seperti trimethyltin (TMT), digunakan untuk meningkatkan pemahaman proses intraseluler senescence yang terjadi. Tujuan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan ekspresi gen terkait senescence yaitu IL-6, TNF-alfa, Bcl-2, p16 dan gambaran histologi lien pada tikus yang diinduksi TMT dengan kontrol. Metode. Sebanyak 10 tikus Sprague-dawley jantan berusia 3 bulan dibagi menjadi dua kelompok, perlakuan dan kontrol. Kelompok perlakuan yaitu tikus yang diinjeksi trimethyltin secara intraperitoneal dengan dosis tunggal 8 mg/kgBB. Nekropsi dilakukan pada kedua kelompok pada hari ke-28, lien diambil kemudian ditimbang dan dipotong. Potongan lien sebagian dimasukkan kedalam RNA later untuk diekstraksi RNA, sebagian lainnya dalam cairan fiksatif untuk dibuat blok paraffin. Kuantitas mRNA dihitung menggunakan metode qRT-PCR dan dianalisis menggunakan perhitungan 2^(-deltadeltaCt). Hasil irisan blok paraffin setebal 4 nanomikro diwarnai dengan hematoksilin eosin dan diamati mengguna mikroskop cahaya. Hasil. Rerata ekspresi gen Bcl-2 (2,180 ± 2,12) lebih tinggi pada lien tikus induksi TMT dibanding kelompok kontrol, sedangkan IL-6 (0,916 ± 0,38) kali lebih rendah dibanding kelompok kontrol. p16 (1,032 ± 1,74) dan TNF-alfa (1,12 ± 0,61) memiliki nilai yang sama dengan kelompok kontrol. Terdapat perbedaan pada gambaran histologi pulpa alba lien tikus yang diinduksi TMT seperti terjadi distorsi minimal, invasi erythrocytus dan infiltrasi neutrophilus. Kesimpulan. Ekpresi gen Bcl-2 lebih tinggi dan terdapat perbedaan gambaran histologi pada lien tikus Sprague-dawley yang diinduksi trimethyltin dibandingkan kontrol. Sedangkan ekspresi gen IL-6, TNF-alfa dan p16 pada lien tikus Sprague-dawley yang diinduksi trimethyltin tidak memiliki perbedaan dibandingkan kelompok kontrol.

Background. Senescence in the immune system or immunosenescence is characterized by an irreversible cell cycle arrest that is accompanied by the secretion of senescence-associated secretory phenotype (SASP) in the form of proinflammatory cytokines. Immunosenescence can indirectly cause structural changes in lymphoid organs. Research related to senescence in a rat model experiments using the aging chemicals induction such as trimethyltin (TMT), can be used to improve understanding of the intracellular senescence process. Objectives. The aim of study was to determine the differences in the expression of senescence-related specifically IL-6, TNF- alfa, Bcl-2, p16, and the differences in histology of the spleen in TMT-induced rats with controls. Methods. Ten male Sprague-Dawley rats aged 3 months were divided into two groups, treatment and control. The treatment group that injected intraperitoneally with a single dose (8 mg/kgBW) of trimethyltin. Necropsies of both groups on 28th day, the spleen were taken and measured. The pieces were put into RNA later for RNA extraction, and partly in the fixative fluid to make paraffin blocks. The mRNA expression was calculated using the qRT-PCR method and analyzed using the 2^(-deltadeltadCt) calculation. The slices of paraffin block were stained with hematoxylin-eosin and observed using a light microscope. Result. The mean of Bcl-2 gene expression (2.180 ± 2.12) was higher in the spleen of TMT-induced rats than in control, while IL-6 (0.916 ± 0.38) was lower than in the control group. p16 (1.032 ± 1.74) and TNF-alfa (1.12± 0.61) had the same value as the control. The histology of splenic white pulp in TMT-induced rats was different compared to controls, there were distortion, erythrocytic invasion, and neutrophilic infiltration. Conclusion. Bcl-2 gene expression was increased and there were differences in histologic features in the spleen of the Trimethyltin-induced Sprague-Dawley rats compared to controls. Meanwhile, the expression of IL-6, TNF-alfa, and p16 genes in the spleen of Sprague-Dawley rats induced by trimethyltin had no difference compared to the control group.

Kata Kunci : Penuaan, Immunosenescence, senescence-associated secretory phenotype, trimethyltin, lien, spleen, qRT-PCR

  1. S2-2022-465966-title.pdf