Pengaruh Asam Klorogenat terhadap Inflamasi Pada Ginjal Tikus Model Diabetes Melitus Tipe 1

ANGGA DEWA M.P, dr. Nur Arfian, Ph.D; Dr. dr. Dwi Cahyani Ratna Sari, M.Kes.PA(K)

2022 | Skripsi | S1 KEDOKTERAN

Diabetes Melitus (DM) dengan hiperglikemia mengakibatkan terjadinya kondisi nefropati diabetik yang menjadi penyebab utama penyakit ginjal stadium akhir. Hiperglikemia juga menyebabkan peningkatan mediator inflamasi, terutama MCP-1 yang menginduksi infiltrasi makrofag. Asam klorogenat diketahui memiliki efek anti-inflamasi, tetapi belum diketahui perannya dalam menurunkan aktivitas inflamasi di ginjal sebagai progresivitas diabetes mellitus tipe 1. Penelitian ini bertujuan untuk mengkaji peran asam klorogenat terhadap inflamasi (Ekspresi mRNA MCP-1 dan CD68) pada ginjal tikus model diabetes melitus tipe 1. Tikus jantan wistar (n=30, usia=2 bulan) dibagi dalam 6 kelompok: Kelompok kontrol (n=5), Kelompok DM yang diinduksi streptozotocin 60 mg/KgBB selama 1,5 bulan (DM1,5, n=5), 2 bulan (DM 2, n=5), serta kelompok DM 1,5 bulan yang diberikan 3 dosis asam klorogenat berbeda selama 2 minggu, yaitu 12,5 mg/kgBB (CGA1, n=5), 25 mg/kgBB (CGA2, n=4), dan 50 mg/kgBB (CGA3, n=6). Sampel urin diambil untuk dilakukan pemeriksaan proteinuria menggunakan tes dipstick sebelum dilakukan terminasi. Pada akhir percobaan, tikus diterminasi dan diambil ginjalnya untuk dilakukan ekstraksi RNA. Ekspresi mRNA MCP-1 dan CD68 diukur menggunakan Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR). Pewarnaan IHC anti-MCP-1 dilakukan pada perwakilan setiap kelompok untuk menunjukkan sinyal positif MCP-1. Hasil penelitian ini menunjukkan ekspresi mRNA MCP-1 dan CD68 pada kelompok DM1,5 lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok kontrol (p>0,05). Pada kelompok DM2 dan CGA3, ekspresi mRNA MCP-1 dan CD68 lebih tinggi dibandingkan kelompok kontrol (p<0,05). Kelompok DM2 menunjukkan ekspresi mRNA MCP-1 (p<0,05) dan mRNA CD68 (p>0,05) yang lebih tinggi dibandingkan kelompok DM1,5. Ekspresi mRNA MCP-1 pada kelompok CGA1 (p<0,05), CGA2 (p>0,05), dan CGA3 (p>0,05) lebih rendah dibandingkan kelompok DM2. Ekspresi mRNA CD68 pada kelompok CGA1 (p<0,05), CGA2 (p<0,05), CGA3 (p>0,05) juga lebih rendah dibandingkan kelompok DM2. Kesimpulan dari penelitian ini yaitu asam klorogenat dapat menurunkan proses inflamasi pada ginjal tikus model diabetes melitus tipe 1

Diabetic Mellitus (DM) with hyperglycemia in diabetic nephropathy is the main cause of end-stage kidney disease. Hyperglycemia also causes an increase in inflammatory mediators, especially MCP-1 which induces macrophage infiltration. Chlorogenic acid has been known to have anti-inflammatory effects, but it is not known to reduce inflammation in the kidneys as the progression of type 1 diabetic mellitus. The aims of this study to examine the role of chlorogenic acid on inflammation (MCP-1 and CD68 mRNA expression) in the kidney of a rat model of type 1 diabetic mellitus. Male Wistar rats (n=30, age=2 months) were divided into 6 groups: control group (n=5), group with diabetic mellitus (DM) induced by streptozotocin 60 mg/KgBW for 1.5 months (DM1,5, n=5), 2 months (DM2, n=5), and the 1.5 month DM group who were given 3 different doses of chlorogenic acid for 2 weeks of 12.5 mg/kgBW (CGA1, n=5), 25 mg/kgBW (CGA2, n=4), and 50 mg/kgBW (CGA3, n=6). Urine samples were taken for proteinuria examination using a dipstick test before termination. At the end of the experiment, the rats were terminated and their kidneys were removed for RNA extraction. The mRNA expression of MCP-1 and CD68 was measured using Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR). IHC anti-MCP-1 staining was performed on representatives of each group to show a positive signal of MCP-1. The result of this study are the mRNA expression of MCP-1 and CD68 in the DM1.5 group was higher than the control group (p>0.05), this was followed by higher expression of MCP-1 and CD68 in DM2 and CGA3 compared to control group (p<0,05). The DM2 group showed a higher expression of MCP-1 (p<0,05) and CD68 (p>0,05) over DM1,5. The expression of mRNA MCP-1 in the CGA1 (p<0.05), CGA2 (p<0.05), and CGA3 (p>0.05) groups were lower than in the DM2 group. The expression of mRNA CD68 in the CGA1 (p<0.05), CGA2 (p>0.05), and CGA3 (p>0.05) groups also were lower than in the DM2 group. The conclusion of this study is chlorogenic acid can reduce the inflammatory process in the kidneys of rat with type 1 diabetic mellitus.

Kata Kunci : diabetes melitus, asam klorogenat, inflamasi, MCP-1, makrofag