Kloning Open Reading Frame dan Ekspresi RuBisCO Bakteri Halofilik Chromohalobacter Salexigens BKL5

LINCE RIA SITOHANG, M. Saifur Rohman, M.Eng.,Ph.D.;Tri Joko, S.P., M.Sc., Ph.D.

2021 | Tesis | MAGISTER BIOTEKNOLOGI

Ribulosa-1,5-bifosfat karboksilase-oksigenase (RuBisCO) merupakan ensim yang berperan sebagai katalisator dalam fiksasi CO2. RuBisCO tidak saja terdapat pada kelompok organisme yang memiliki kemampuan dalam memfiksasi karbon, tetapi juga diketemukan pada beberapa jenis bakteri, salah satunya adalah bakteri halofilik Chromohalobacter salexigens BKL5. Choromohalobacter salexigens merupakan bakteri halofilik yang mampu hidup pada lingkungan dengan konsentrasi garam hingga 15%. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan cloning open reading frame (ORF) RuBisCO dari Chromohalobacter salexigens BKL5 dan menguji ekspresi rekombinan RuBisCO pada sistem ekspresi Escherichia coli BL21(DE3). ORF RuBisCO diamplifikasi dari genom C. salexigens BKL5, yang selanjutnya ORF tersebut disisipkan pada vektor ekspresi pCold-IV, dan ditraformasikan pada Escherichia coli BL21(DE3). Hasil uji ekspresi menenujukkan bahwa ORF RuBisCO berhasil diekspresikan pada Escherichia coli BL21(DE3). Uji solubilitas terhadap rekombinan RuBisCO menunjukkan bahwa protein hasil ekspresi berada dalam bentuk badan inklusi atau bersifat tidak larut. Perlu dilakukan pengujian lebih lanjut untuk memperoleh rekombinan RuBisCO yang bersifat larut.

Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase-oxygenase (RuBisCO) is an enzyme that catalysis CO2 fixation. RuBisCO is found not only in most carbon fixing organisms but also in several bacterial, such as halophilic bacterium, Chromohalobacter salexigens BKL5. Chromohalobacter salexigens BKL5 is halophilic bacterium that able to grow on the environment with 15% of salt. The objectives of this work were to clone the RuBisCO open reading frame (ORF) from Chromohalobacter salexigens BKL5 and overexpress the recombinant RuBisCO in Escherichia coli BL21(DE) system. The ORF was isolated from Chromohalobacter salexigens BKL5 genom and clone it into expression vector pColdIV. The resultant vector was then used to transform E. coli BL21(DE3) as a host. The result showed that the recombinant RuBisCO was successfully cloned and expressed in E. coli system. However, the recombinant protein was expressed in insoluble form (inclusion body). Therefore, it is necessary to further examine in order to solubilize the recombinant RuBisCO.

Kata Kunci : Kloning, Ekspresi, RuBisCO, Chromohalobacter salexigens BKL5, CO2.