Evaluasi Kerusakan DNA pada Sel T47D dengan Perlakuan Ekstrak Kloroform Daun Gaharu (Gyrinops versteegii (Gilg.) Domke dan Aquilaria malaccensis Lamk.)

NUR AHMAD RUDIN, Lisna Hidayati, S.Si., M. Biotech.

2021 | Skripsi | S1 BIOLOGI

Kanker payudara merupakan kanker dengan kasus terbanyak kedua di dunia setelah kanker paru-paru dan menjadi penyebab kematian paling banyak pada wanita. Kerusakan DNA adalah perubahan struktur dasar DNA yang menyebabkan kondisi abnormal gen, mempengaruhi perubahan morfologi sel sehingga meningkatkan risiko kanker. Salah satu indikator penting dalam pengobatan kanker adalah apoptosis. Salah satu hallmark apoptosis adalah fragmentasi DNA. Paradigma dunia pengobatan cenderung mengikuti gaya hidup kembali ke alam. Penelitian sebelumnya menunjukkan daun gaharu Gyrinops versteegii dan Aquilaria malaccensis berpotensi dikembangkan sebagai antikanker. Uji sitotoksisitas terhadap sel kanker payudara T47D menunjukkan sitotoksisitas moderat pada ekstrak campuran daun gaharu (141,47 ug/mL) dan G. versteegii (152,84 ug/mL), dan sitotoksik lemah pada A. malaccensis (206,54 ug/mL). Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi kerusakan DNA pada sel T47D dengan ekstrak kloroform daun gaharu (A. malaccensis dan G. versteegii). Ekstraksi dilakukan dengan metode soxhletasi dan pelarut kloroform. Morfologi sel, fragmentasi DNA, dan comet assay dilakukan dengan perlakuan ekstrak kloroform daun gaharu konsentrasi 141,47 ug/mL (ekstrak campuran), 152,84 ug/mL (G. versteegii), 206,54 ug/mL (A. malaccensis), 97,08 ug/mL (herbal komersial), dan 0,39 ug/mL (Doxorubicin HCl) pada kultur sel T47D selama (3, 6, dan 48) jam. Analisis data dilakukan secara kualitatif berdasar jumlah fragmen DNA yang terbentuk dan secara visual pada morfologi sel dan komet yang terbentuk. Analisis secara kuantitatif dilakukan dengan mengukur fragmen DNA dan tingkat kerusakan DNA menggunakan Comet Score: Automatic Comet Assay Software 2.0.0.38 dan Laptop Lenovo G410 RAM 8 GB Core I5. Hasil penelitian menunjukkan ekstrak kloroform A. mallacensis dan G. versteegii mempengaruhi perubahan morfologi sel T47D berupa pengkerutan membran dan berkurangnya volume sel mulai perlakuan 6 jam dan teramati lebih jelas pada perlakuan 48 jam. Induksi fragmentasi DNA dimulai pada waktu perlakuan 6 jam dengan jumlah 3 fragmen dan ukuran fragmen (800 - 2200) bp. Terbentuknya komet sel T47D dimulai pada waktu perlakuan 6 jam dengan kategori kerusakan DNA ringan hingga sedang. Terdapat keterkaitan pola antara intensitas ekor dan kepala, serta tidak terkait pada komet area. Hasil tingkat kerusakan DNA yang didapatkan pada comet assay sesuai dengan jumlah fragmen pada fragmentasi DNA.

Breast cancer is the second most common cancer in the world after lung cancer and leading cause of death for women. DNA damage is a change in the basic structure of DNA that caused abnormal condition, change cell morphology, and increases the risk of cancer. One of the important indicators in cancer treatment is apoptosis. One of the hallmark of apoptosis is DNA fragmentation. The world of medicine paradigm tends to follow a lifestyle back to nature. Previous research has shown that agarwood leaves of Gyrinops versteegii and Aquilaria malaccensis have the potential to be developed as anticancer agents. Cytotoxicity assay on breast cancer T47D cell lines show IC50 value with moderate cytotoxic on mixed extract of agarwood leaves (141,47 ug/mL) and G. versteegii (152,84 ug/mL), and low cytotoxic on A. malaccensis (206,54 ug/mL). Therefore, this study aims to evaluate DNA damage in T47D cells with chloroform extract of agarwood leaves. Extraction was carried out with soxhletation method and chloroform solvent. Morphology cell, DNA fragmentation, and comet assay were carried out by treatment chloroform extract of agarwood leaves with concentration of 141,47 ug/mL (mixed extract), 152,84 ug/mL (G. versteegii), 206,54 ug/mL (A. malaccensis), 97,08 ug/mL (commercial herbs), and 0,39 ug/mL (Doxorubicin HCl) on T47D cell culture for (3, 6, and 48) hours. Data analysis was carried out qualitatively by number of DNA fragment and visually on cell morphology, and comet. Quantitative analysis was carried out by measuring DNA fragments and the level of DNA damage using Comet Score: Automatic Comet Assay Software 2.0.0.38 and Laptop Lenovo G410 RAM 8 GB Core I5. The results showed that chloroform extracts of A. mallacensis and G. versteegii were influence changing of membrane shrinkage and reduce of cell volume on cell morphology starts on 6 hours treatment and observed clearly at 48 hours treatment. Induction of DNA fragmentation started at 6 hours treatment time with 3 fragments and fragment size (800 - 2200) bp. The comet formation of T47D cells was started at 6 hours treatment with the category of DNA damage are mild to moderate. There is a correlation pattern between tail and head intensity, and is not related to area comets. The level of DNA damage obtained on the comet assay were in accordance with the number of fragments in DNA fragmentation.

Kata Kunci : Aquilaria malaccensis, Gyrinops versteegii, comet assay, fragmentasi DNA, kerusakan DNA, sel T47D