EKSPRESI GEN IPP1 DAN GPS2 UNTUK SINTESIS TERPENOID PADA KULTUR KALUS JERUK PURUT (Citrus hystrix DC.)

MUHAMMAD ADNAN, Woro Anindito Sri Tunjung, S.Si, M.Sc., Ph.D.

2020 | Skripsi | S1 BIOLOGI

Kalus jeruk purut mengandung berbagai senyawa bioaktif yang memiliki aktivitas antikanker antara lain senyawa yang termasuk ke dalam kelompok terpenoid. Sintesis senyawa kelompok tersebut melibatkan beberapa gen di antaranya adalah IPP1 dan GPS2. Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari ekspresi gen IPP1 dan GPS2 pada kultur kalus jeruk purut. Induksi kalus dari biji jeruk purut dilakukan pada medium Murashige & Skoog (MS) dengan penambahan 2,4-Dichlorophenoxyaceticacid (2,4-D) 2 ppm. Pengamatan dilakukan pada kalus generasi 0 (G0) dan generasi 1 (G1) (pasca subkultur). Analisis ekspresi gen IPP1 dan GPS2 pada kalus G0 dan G1 dilakukan menggunakan quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction (qRT-PCR). Hasil yang diperoleh menunjukkan kedua gen tersebut diekspresi pada kalus G0 dan G1, akan tetapi ekspresi kedua gen lebih tinggi pada kalus G1. Analisis statistik menunjukkan perbedaan level ekspresi IPP1 tidak signifikan dan perbedaan level ekspresi GPS2 signifikan antara kedua generasi. Hasil yang diperoleh mengindikasikan bahwa kalus G1 mensintesis terpenoid pada level yang lebih tinggi dibanding kalus G0, sehingga lebih baik menggunakan kalus G1 sebagai bahan baku suspensi sel yang dibuat menjadi obat kanker. Hal ini juga menunjukkan bahwa kalus jeruk purut dapat mensintesis senyawa-senyawa terpenoid dan berpotensi menjadi obat kanker.

Kaffir lime callus contains various bioactive compounds with anticancer activities such as those belonged to terpenoid group. The synthesis of those compounds involves various genes such as IPP1 and GPS2. This study aims to study the expression of IPP1 and GPS2 genes in kaffir lime callus culture. Callus induction from kaffir lime seeds was performed on Murashige & Skoog (MS) medium with addition of 2,4-Dichlorophenoxyaceticacid (2,4-D) of 2 ppm. The study was performed on callus generation 0 (G0) and generation 1 (G1). Gene expression analysis of IPP1 and GPS2 genes in callus G0 and G1 was carried out using quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction (qRT-PCR). The results obtained showed that the two genes were expressed in both callus G0 and G1, however the expression of those genes was higher in callus G1. Statistical analysis showed the difference between the level of IPP1 expression was not significant and GPS2 expression was significant between the two generations. These results suggest that callus G1 synthesizes terpenoid at higher level compared to callus G0, as such it is better to utilize callus G1 as material for cell suspension that will be made into cancer drug. These results also show that kaffir lime callus culture is capable of producing terpenoid compounds and possess the potency as a cancer drug.

Kata Kunci : kalus G0, kalus G1, qRT-PCR, comparative Ct, metode Livak