Aktivitas sitotoksik, anti proliferatif dan induksi apoptosis ekstrak dan fraksi biji pinang (Areca catechu L.) dengan dan tanpa kombinasi dengan Doksorubisin terhadap sel T47D

RAHMI, Fitria, Dr. Edy Meiyanto, M.Si.,Apt

2007 | Tesis | S2 Ilmu Farmasi

Ko-kemoterapi merupakan terapi menggunakan kombinasi agen kemoterapi dengan agen kemopreventif (senyawa non toksik tetapi mampu mencegah pembentukan maupun menghambat perkembangan kanker). Terapi ini dilakukan sebagai pendekatan untuk meningkatkan efikasi dan menurunkan toksisitas agen kemoterapi dalam terapi kanker payudara. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktifitas sitotoksik, anti proliferatif dan induksi apoptosis biji pinang (Areca catechu L.) dengan atau tanpa kombinasi dengan doksorubisin terhadap sel kanker payudara T47D. Ekstraksi dilakukan dengan alat Soxhlet menggunakan etanol 96%, dilanjutkan partisi menggunakan heksan, kloroform dan etil asetat. Ekstrak etanolik (EP), fraksi heksan (FHP), fraksi kloroform (FKP), fraksi etil asetat (FEP) dan fraksi air (FAP) kemudian diuji aktifitas sitotoksiknya menggunakan metode MTT terhadap sel T47D, baik dalam keadaan tunggal maupun kombinasi dengan doksorubisin. Uji pengamatan kinetika prolifersi, pengecatan AgNOR, double staining (akridin oranye-etidium bromid) dan imunositokimia dilakukan guna melihat mekanisme yang memperantarai efek yang terjadi. Selanjutnya Combination Index (CI) dari perlakuan kombinasi dihitung untuk menentukan efek yang dihasilkan (sinergis, additif atau antagonis). Hasil uji menunjukan bahwa ekstrak etanolik biji pinang (EP), FHP, dan FKP secara signifikan mampu menghambat sel T47D dengan harga IC50 berturutturut adalah 50 ug/ml, 39 ug/ml dan 27 ug/ml. Doksorubisin menghambat sel dengan harga IC50 32 nM (1,7x10-2 ug/ml). Kombinasi doksorubisin-EP dan doksorubisin-FKP pada sel T47D memberikan efek yang sinergistik (CI<0,9) atau additif (CI=0,9-1,1). Konsentrasi kombinasi doksorubisin-EP dan doksorubisin- FKP yang paling efektif berturut-turut adalah 6nM-8ug/ml dan 11nM-10ug/ml dengan CI<0,5. Efek sitotoksik yang ditunjukkan oleh ekstrak/fraksi biji pinang tersebut, baik perlakuan tunggal maupun kombinasinya adalah melalui penghambatan kinetika proliferasi dan induksi apoptosis. Pengamatan terhadap apoptosis dan ekspresi protein regulatornya memperlihatkan bahwa perlakuan kombinasi menginduksi apoptosis pada sel T47D melalui aktivasi Caspase-3 tanpa meningkatkan ekspresi protein Bax. Hasil penelitian ini menunjukan biji pinang berpotensi meningkatkan efektifitas doksorubisin pada sel kanker payudara T47D

In order to enhance the efficacy and reduce toxicity of chemotherapeutic agents against breast cancer treatment, here, we investigated the combination chemotherapy. The combination chemotherapy (co-chemotherapy) is a therapy of chemotherapy combined with non toxic or less toxic phytochemicals which prevents and inhibits cancer. The aim of this research is to examine the cytotoxic, anti proliferative and apoptotic induction activity of Areca catechu L. seed with or without combination with doxorubicin on T47D human breast cancer cell line. Areca catechu L. seed was extracted using ethanol 96% followed by partition using hexane, chloroform and ethyl acetate. The cytotoxic activities against T47D human breast carcinoma cells of ethanolic extract (EP), hexane fraction (FHP), chloroform fraction (FKP), ethyl acetate fraction (FEP) and aquadest fraction (FAP) single or in combination with doxorubicin were assayed using MTT assay by measuring their inhibition effect on cell growth. The mechanism of the effect was evaluated based on the proliferation profiles, AgNOR staining, double staining and immunocytochemistry. The combination index (CI) of the inhibitory activity of cell growth was calculated to determine the effects (synergistic, additive or antagonistic). The result showed that single application of EP, FHP, FKP and doxorubicin inhibits T47D cell growth with the IC50 of 50 ug/ml, 39 ug/ml, 27ug/ml and 32 nM (1.7 x 10-2 ug/ml), respectively. The combination application of doxorubicin-EP and doxorubicin-FKP on T47D cells showed synergistic (CI<0.9) or additive effect (CI=0.9-1.1). The effective combination of doxorubicin-EP and doxorubicin-FKP was 6 nM - 8 ug/ml and 11 nM – 10 ug/ml respectively on CI<0.5. The mechanism of cytotoxic effect was proved through the inhibition of proliferation and induction of apoptosis. The detection of apoptosis showed that combination treatment induces the apoptosis through activation of Caspase-3 without increasing the expression of Bax. This result showed that both ethanolic extract and chloroform fraction increase the effectiveness of doxorubicin against T47D human breast cancer cell line.

Kata Kunci : Sitotoksik,Biji Pinang,Doksorubisin,Sel Kanker Payudara T47D, combination application, Areca catechu L., doxorubicin, T47D cell